[发明专利]一种利用反胶团法分离纯化鱼精蛋白的方法

摘要

本发明属于生物活性物质分离纯化技术领域，特别涉及一种利用反胶团法直接从鱼精蛋白粗提液中分离纯化鱼精蛋白的方法。本发明的目的是解决目前鱼精蛋白纯化工艺复杂、步骤多、周期长的问题，它采用由表面活性剂和有机溶剂构成的反胶团溶液直接从鱼精蛋白粗提液中分离纯化鱼精蛋白，通过调节水相pH、离子强度、相比、两相接触时间等萃取工艺条件，可实现鱼精蛋白的高效萃取和反萃，酶活回收率最高可达到96％以上，纯化因子达到2.1以上，该工艺同时具有浓缩作用和脱色作用，此外，采用反胶团技术分离纯化鱼精蛋白周期短、便于连续操作、易于放大。

主权项

1、一种利用反胶团法分离纯化鱼精蛋白的方法，从利用鱼白制得的鱼精蛋白粗提液中萃取纯化鱼精蛋白，其特征是包括如下步骤：(1)制备鱼精蛋白粗提液；将鱼白置于组织捣碎机中，加入0.14M NaCl溶液，匀浆破碎组织后，用纱布过滤得浆液。然后进行离心分离，弃上清夜，得沉淀即鱼精蛋白与DNA的复合物DNP，每克DNP加入4ml 7.5％的硫酸，搅拌，混合均匀，离心10min，弃沉淀，沉淀中主要为DNA，上清液即为鱼精蛋白粗提液；(2)制备反胶团溶液，其由表面活性剂、助溶剂、有机溶剂和水构成，各组分重量份配比为，表面活性剂∶助溶剂∶有机溶剂∶水＝(20-100)∶(0-200)∶(800-880)∶(0-10)，其配制步骤为：按上述比例称取各组分并均匀混合，震荡后静置，至完全溶解，混合均匀，制得反胶团溶液；(3)进行前萃取，首先将鱼精蛋白粗提夜的pH值调节到7.0-10.5；然后加入氯化钠调节离子强度到0.05-0.2M，然后将其同反胶团溶液混合，反胶团溶液与鱼精蛋白粗提液的体积比为1∶1-1∶50，混合时间为1-10分钟，操作温度为10-35℃；最后将反胶团溶液与鱼精蛋白粗提液的混合液进行离心处理，取上层液体为负载反胶团溶液；(4)配制反萃水溶液，该反萃水溶液包括反萃助剂、碱化剂、盐和水，其重量份配比为，反萃助剂∶碱化剂∶盐∶水＝(0.5-30)∶(0-10)∶(0.5-12)∶(48-98)；(5)进行反萃取，将负载反胶团溶液与反萃水溶液按其体积比1∶1-1∶50混合，混合时间为1-60min，操作温度为20-45℃，然后将负载反胶团溶液与反萃水溶液的混合液进行离心处理，取下层液体为纯化后的鱼精蛋白溶液。