[发明专利]一种血管内皮抑制素生物活性的检测方法

摘要

本发明公开了一种血管内皮抑制素生物活性的检测方法，该方法分别利用相同浓度梯度的倍比稀释后的血管内皮抑制素标准品和样品抑制HUVEC细胞增殖，并采用微量酶反应比色法测定血管内皮抑制素对HUVEC细胞的增殖抑制活性，进而分析血管内皮抑制素对血管生成抑制的生物活性。该方法采用血管内皮抑制素标准品校正不同批次血管内皮抑制素样品的检测误差，使得血管内皮抑制素的细胞增殖抑制活性检测结果具有特异性和重复性，克服了现有血管内皮抑制素活性检测方法的重复性差、方法难统一以及不能满足大规模生产、多批次产品质量控制的缺陷。

主权项

1、一种血管内皮抑制素生物活性的检测方法，包括如下步骤：a、人脐静脉血管内皮细胞HUVEC传代培养至对数生长期，胰酶消化后均匀悬浮，向培养孔中接种相同体积的细胞悬液；b、将血管内皮抑制素标准品和待测样品在步骤a所述的培养孔中分别进行相同浓度梯度的倍比稀释，培养孔中细胞悬液继续细胞培养；c、微量酶反应比色法测定培养孔中的OD值；d、将血管内皮抑制素标准品和待测样品的倍比稀释浓度分别与对应的OD值采用四参数origin拟合，分别得到血管内皮抑制素标准品和待测样品抑制型S-形曲线，所述四参数为最大光吸收值、最小光吸收值、半效量浓度和斜率；e、按下式计算试验结果：样品生物学活性(U/ml)＝Pr×Ds×Es/(Dr×Er)，其中，Pr为标准品生物学活性；Ds为样品稀释倍数；Dr为标准品稀释倍数；Es为样品相当于标准品半效量的稀释倍数；Er为标准品半效量的稀释倍数。