[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌伴孢晶体反浮选分离纯化生产工艺

摘要

本发明提供了一种苏云金芽孢杆菌伴孢晶体反浮选分离纯化生产工艺，具体生产工艺为：按重量百分比称取牛肉膏0.2～0.4％，蛋白胨0.6～1.5％，氯化钠0.3～0.6％，琼脂1.3～2.5％，水95～98％，用NaOH调pH＝7.4～7.6，100～130℃灭菌20～40分钟，倒入培养皿中，自然冷却至室温，液体凝固形成琼脂固体培养基；在培养基表面上按“之”字形接种，之后在生化培养箱中26～36℃培养36～48小时，得到无菌水菌苔悬浊液，注入高效微泡浮选柱中浮选，离心液浆10～20min，得到伴孢晶体半成品；用生理盐水和无菌纯净水洗涤伴孢晶体半成品，以7000～9000转/分钟的转速离心，得到含水的伴孢晶体，经真空干燥得到伴孢晶体纯品，于－20～－80℃环境中保存。该方法工艺简单、易于操作、产品纯度在99.99％以上、生产成本低、适合于工业化生产。

主权项

1、一种苏云金芽孢杆菌伴孢晶体反浮选分离纯化生产工艺，其特征在于：按重量百分比称取牛肉膏0.2～0.4％，蛋白胨0.6～1.5％，氯化钠0.3～0.6％，琼脂1.3～2.5％，水95～98％，用NaOH调pH＝7.4～7.6，100～130℃灭菌20～40分钟，在洁净工作台中将灭菌后的液体倒入已灭过菌的大培养皿中，自然冷却至室温，液体凝固形成琼脂固体培养基；用接种环沾取Bt菌种，在琼脂固体培养基表面接种，之后在生化培养箱中26～36℃培养36～48小时；用无菌纯净水将菌苔冲洗到容器中，得到无菌水菌苔悬浊液；用超声波细胞粉碎机处理菌苔悬浊液10～30分钟后，将此菌苔悬浊液注入微泡浮选柱中浮选；在此反浮选过程中，芽孢和营养体碎片进入泡沫层而脱离体系，伴孢晶体则留在液浆中，之后以7000～9000转/分钟的转速离心液浆10～20min，弃去上清液，得到伴孢晶体半成品；洗涤伴孢晶体半成品，以7000～9000转/分钟的转速离心，得到含水的伴孢晶体，在-20～-80℃，0.1～1.0Pa真空度条件下干燥3～4小时，得到伴孢晶体纯品。