[发明专利]乳腺特异性表达载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M₀；M₀自上游至下游依次为同源臂T₁－T₆；2)将M₀插入载体，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过三次同源重组，T₅和T₆抓获乳蛋白基因座3’调控区；T₃和T₄抓获完整的外源目的蛋白基因组序列；T₁和T₂抓获乳蛋白基因座5’调控区。本发明得到了乳蛋白－目的蛋白的杂合基因座，杂合基因座内包含乳蛋白上下游表达调控序列，中间是外源目的蛋白的基因组序列。本发明将为动物乳腺个体表达系统注入新的活力，有力促进乳腺生物反应器表达系统的推广运用。

主权项

1、乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M0；M0自上游至下游依次为同源臂T1、同源臂T2、同源臂T3、同源臂T4、同源臂T5、同源臂T6；所述6个同源臂的长度均为400-600bp；同源臂T5和同源臂T6能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座3’调控区；同源臂T3和同源臂T4能通过与外源目的蛋白BAC同源重组获得完整的外源目的蛋白基因组序列；同源臂T1和同源臂T2能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座5’调控区；2)将所述DNA片段M0插入载体中，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过与所述乳蛋白BAC进行两次同源重组、与所述外源目的蛋白BAC进行一次同源重组，将步骤2)得到的连续三次基因抓捕载体中的DNA片段M0替换为DNA片段M1，得到所述外源目的蛋白的乳腺特异性表达载体；M1自上游至下游依次为所述乳蛋白基因座3’调控区、完整的所述外源目的蛋白基因组序列、所述乳蛋白基因座5’调控区。