[发明专利]组织工程皮肤构建方法及用其制备的组织工程皮肤

摘要

一种组织工程皮肤构建方法，包括以下步骤：(1)配制组织工程皮肤培养液(2)制备人体成纤维细胞饲养层(3)制备凝胶生物材料：(4)构建和培养组织工程皮肤。本发明组织工程皮肤构建方法，系采用添加经过抑制增殖处理的成纤维细胞来完成与表皮细胞的相互作用，从而提高表皮细胞的成熟和分化程度，对提高化合物体外毒性检测的精确度有着重要的作用，从而使其制备的组织工程皮肤能够更有效阻挡化合物对活性细胞的毒性作用，提高组织工程皮肤对化合物毒性的预测精确度，最终产生更多有效的基于组织工程皮肤的动物替代检测方法。

主权项

1、一种组织工程皮肤构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制组织工程皮肤培养液：以商用无血清表皮细胞培养液为基础液，再按每500mL基础液标准添加胰岛素20～50ng，氢化可的松100～300μg，维生素C 20～40mg，氯化钙1～2mM；(2)制备人体成纤维细胞饲养层：将人体来源的成纤维细胞经抑制增殖处理后，以常规细胞培养液添加体积比2～20％血清培养；(3)制备凝胶生物材料：将I型胶原蛋白、壳聚糖、透明质酸和硫酸软骨素按照8～12∶1～3∶1～2∶1～2质量份配比混合均匀，然后以1M氢氧化钠溶液调节PH至7.2～7.4；(4)构建和培养组织工程皮肤：将所述步骤(2)制备的1～10×105个成纤维细胞与1～3mL所述步骤(3)制备的凝胶生物材料充分混合，得复合物，所述复合物在37℃，5％CO2培养箱中培养2h，然后在上面添加1～10×105/mL人源表皮细胞悬液1mL，继续培养1h后，添加由所述步骤(1)配制的组织工程皮肤培养液3～5mL，继续培养至第5天，将所得的组织工程皮肤进行气液面培养，第20天结束培养，获得含有完好分化和成熟的表皮结构的组织工程皮肤。