[发明专利]一种昆虫源抗菌蛋白/肽基因的构建及筛选方法有效
| 申请号： | 200810120142.6 | 申请日： | 2008-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN101328616A | 公开（公告）日： | 2008-12-24 |
| 发明（设计）人： | 慎小晶;成雄鹰;吴珏靖;叶恭银 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/08;C40B30/00;C12N15/12;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310027浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种昆虫源抗菌蛋白/肽基因文库的构建及筛选方法，包括以下步骤：(1)昆虫源抗菌蛋白/肽基因的cDNA表达性文库的构建；(2)cDNA表达性文库的筛选：a.制备SOLR菌液；b.将原噬菌体文库转化入制备好的SOLR菌液中并测定效价；c.制备LB/Amp+滤膜平板；d.取已转化的SOLR菌液铺板，经培养直至菌落生长到0.9～1.1毫米，转至染色琼脂培养基，染色；同时与未经IPTG诱导培养的作对照；挑取蓝色菌落，于100微升含20％甘油的LB/Amp+培养液中，－70℃贮存，得昆虫源抗菌蛋白/肽基因。采用本发明的方法构建及筛选昆虫源抗菌蛋白/肽基因文库，能大大提高筛选的针对性与效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 昆虫 抗菌 蛋白 基因 构建 筛选 方法 | ||
【主权项】：
1、一种昆虫源抗菌蛋白/肽基因文库的构建及筛选方法，其特征在于包括以下步骤：(1)昆虫源抗菌蛋白/肽基因的cDNA表达性文库的构建：自昆虫分离总RNA，提取poly(A)+RNA，克隆构建得昆虫源抗菌蛋白/肽基因的cDNA表达性文库；(2)cDNA表达性文库的筛选：a、制备SOLR菌液；b、将原噬菌体文库转化入制备好的SOLR菌液中并测定效价；c、制备LB/Amp+滤膜平板；d、取已转化的SOLR菌液铺板，先在0.45mm的LB/Amp+微孔滤膜平板上涂板，37℃倒置培养15小时左右至膜上有0.1～0.5mm的菌落形成；再转移至LB/Amp+/IPTG+培养基，37℃倒置培养3～4小时，至菌落生长到0.9～1.1毫米，转至染色琼脂培养基，染色10～15分钟；同时与未经IPTG诱导培养的作对照；挑取蓝色菌落，于100微升含20％甘油的LB/Amp+培养液中，-70℃贮存，得昆虫源抗菌蛋白/肽基因。
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