[发明专利]抗血吸虫单克隆抗体NP11－4单链抗体及其制备方法、应用

摘要

本发明抗血吸虫单克隆抗体NP11－4单链抗体及其制备方法、应用涉及基因工程技术及血吸虫病治疗药物领域。本发明应用定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单克隆抗体NP11－4，利用基因工程技术提取杂交瘤细胞总RNA，RT－PCR方法扩增V_H、V_L基因，利用重叠延伸PCR将V_H和V_L基因以V_H－linker－V_L形式连接成单链抗体基因，然后与pBAD/gIIIA载体连接，克隆至大肠杆菌Top10F’，诱导目的蛋白可溶性表达。表达的抗血吸虫单克隆抗体NP11－4单链抗体N端从第1个氨基酸到第122个氨基酸为单链抗体的重链可变区(V_H)，从第141个氨基酸到第254个氨基酸为单链抗体的轻链可变区(V_L)，两者之间的linker由重复的甘氨酸(Gly)和丝氨酸(Ser)18个氨基酸组成，单链抗体全长254个氨基酸。

主权项

1、一种抗血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体，即抗血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体N端从第1个氨基酸到第122个氨基酸为单链抗体的重链可变区(VH)，从第141个氨基酸到第254个氨基酸为单链抗体的轻链可变区(VL)，两者之间由重复的甘氨酸(Gly)和丝氨酸(Ser)18个氨基酸组成的短肽以VH-linker-VL的形式连接，全长254个氨基酸，其氨基酸序列为：Leu Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser SerVal Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Trp Leu GlyTrp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr ProGly Gly Val Tyr Ile Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu ThrAla Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser GluAsp Val Phe Val Tyr Phe Cys Ala Arg Val Gly Tyr Asp Gly Ser Ser Gln SerLeu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Ser SerArg Ser Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Glu Leu Asp IleLeu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Val SerIle Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Ash Gly Asn Thr Tyr LeuGlu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Lys ValSer Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly ThrAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr TyrCys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu GluIle Lys。