[发明专利]一种鉴定单亲水牛亲权关系的方法及其引物、试剂盒

摘要

本发明公开了一种鉴定单亲水牛亲权关系的方法及其引物、试剂盒，属于基因工程技术领域。本发明筛选出多态性丰富的8个微卫星引物，以待检水牛基因组DNA为模板进行PCR扩增，对PCR扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，根据检测结果判断每个个体的基因型，根据基因型计算单亲亲权指数PI值、亲子相对概率值W值，根据W值判断亲权关系是否存在。为进一步提高鉴定的稳定性、准确性和灵敏度，本发明还根据普通牛mtDNA的D-Loop区设计引物进行线粒体遗传鉴定。本发明将微卫星与线粒体遗传标记两种方法相结合，从不同的角度进行鉴定，且鉴定结果一致，提高了亲权鉴定的稳定性、准确性、灵敏度，使鉴定范围更广、样品要求更低。

主权项

1、一种鉴定单亲水牛亲权关系的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)从普通牛种微卫星标记中，筛选出多态性丰富的微卫星引物；(2)以待检水牛基因组DNA为模板，在筛选出的微卫星引物的引导下进行25μL反应体系的PCR扩增；(3)对微卫星PCR扩增片段进行8％聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；(4)根据电泳检测结果判断每个个体的基因型，根据基因型计算单亲亲权指数PI值、并根据PI值计算出亲子相对概率值W值，当W值大于或等于99.73％时，则认定假设亲代与子代个体有亲生关系，当W值小于99.73％时，则可以认为假设亲代与子代个体不具有亲生关系；上述微卫星引物包括以下引物：由序列表中序列1和序列2的核苷酸序列组成的微卫星引物ETH225；由序列表中序列3和序列4的核苷酸序列组成的微卫星引物BM1818；由序列表中序列5和序列6的核苷酸序列组成的微卫星引物INRA035；由序列表中序列7和序列8的核苷酸序列组成的微卫星引物BM2113；由序列表中序列9和序列10的核苷酸序列组成的微卫星引物TGLA227；由序列表中序列11和序列12的核苷酸序列组成的微卫星引物CSRM60；由序列表中序列13和序列14的核苷酸序列组成的微卫星引物BM2934；由序列表中序列15和序列16的核苷酸序列组成的微卫星引物BM1862。