[发明专利]链霉菌单孢子悬液制备方法

摘要

一种制备链霉菌单孢子悬液的方法。解决现有制备方法中存在的单孢子制备率低的问题。将121℃灭菌20-30min的无菌水加入到培养有链霉菌斜面的试管中，用接种环轻轻刮下孢子，将含有孢子的无菌水转入三角瓶中，加入玻璃珠，在摇床上打碎，经滤膜过滤后即得到单孢子率在98％以上的单孢子悬液。

主权项

1、一种链霉菌单孢子悬液制备方法，其特征是该方法包括：第一、保证无菌条件下，于具棉塞试管中制备菌株最适宜的斜面培养基；第二、将链霉菌孢子在无菌条件下接种于制备好的斜面培养基上，在生化培养箱中常规培养5～14天，待斜面上菌落生长成熟后备用；第三、将0. 45μm滤膜过滤的蒸馏水于高压灭菌锅中121℃灭菌20～30min备用；第四、向第二步菌落新生长成熟的试管中加入10～15ml第三步灭菌后的蒸馏水，在无菌条件下用接种环轻轻刮下斜面上孢子，将含有孢子的无菌水转入经灭菌后的50ml小三角瓶中，用无菌蒸馏水调整孢子悬液体积至20ml，加入5～10粒直径3～5mm的无菌玻璃珠，在回转式摇床上于150～250r/min条件下打碎1～3h；第五、用5～10ml无菌注射器吸取第四步中经打碎的孢子悬液；第六、在第五步所述注射器前部加装直径10～25mm无菌过滤头，内装孔径为1.0～5.0μm的醋酸纤维素或尼龙无菌滤膜；第七、手动加压使注射器中的孢子悬液通过滤膜并收集于无菌容器内即得单孢子悬液。