[发明专利]里氏木霉液体深层发酵纤维素酶及其酶促打浆工艺

摘要

本发明公开了一种里氏木霉液体深层发酵纤维素酶及其酶促打浆工艺，采用里氏木霉为发酵菌株，通过深层液体发酵的方式自制纤维素酶用于酶促打浆的新工艺。该技术工艺是采用所要处理的纸浆为发酵碳源，通过深层液体发酵的方式，经过发酵培养基和发酵条件优化制得所需要的纤维素酶，用于该纸浆的酶促打浆。本发明工艺简单、设备投资少、成本低、工艺流程紧凑，采用所要处理的纸浆为发酵碳源能够显著提高酶液的适应性，纤维素酶的酶活高、用量少，效果好，具有降低打浆能耗的效果。适合应用于我国现有的造纸原料结构状况的制浆原料的打浆工艺。

主权项

1、一种纤维素酶的制备方法，其特征在于：所述纤维素酶，其使用的生产菌株为里氏木霉，保藏号为，所述纤维素酶的制备方法如下：将里氏木霉试管斜面菌种接入液体种子发酵罐(1)中进行种子发酵得到所需要的液体种子，然后按照一定的接种量将液体种子接入纤维素酶发酵罐(2)，并且在一定的发酵工艺条件下发酵，最后经过离心分离制得所需纤维素酶酶液，并将其储存在纤维素酶存储罐(3)中以备用，所述发酵工艺参数如下：1)、里氏木霉试管斜面培养基：1％-2％CMC，4％-8％营养元素液，0.1％-0.5％微量元素液，2％-3％琼脂，pH6.0；2)、里氏木霉菌种的培养：将菌种接于斜面培养基上，在培养箱中于29±1℃条件下培养4-7天后使用或4℃下保存备用；3)、液体种子发酵培养基：1％-3％葡萄糖，4％-8％营养元素液，1％-4％麸皮，0.1％-0.4％微量元素液；4)、纤维素酶发酵培养基：碳源为0.1％-3％速生材硫酸盐浆，8％-10％营养元素液，0.2％-0.5％微量元素液，1％-4％麸皮，0.1％-0.2％表面活性剂Tween-80；5)、液体种子发酵条件：温度30-40℃，pH5-7，搅拌速度250-300r/min，通风量0.2-0.3m3/h，发酵时间36-48h；6)、纤维素酶发酵条件：温度30-40℃，pH5-8，接种量2％-3％，搅拌速度250-300r/min，通风量0.2-0.3m3/h，发酵时间72-96h；所述营养元素液配方为：取3-10g柠檬酸钠，5-20g磷酸二氢钾，1-10g硫酸铵，0.5-5g硫酸镁，0.1-5g氯化钙溶解后定容至100ml；所述微量元素液配方为：1-5g硫酸亚铁，0.1-1g硫酸锰，0.1-1g氯化锌，0.5-5g氯化钴，1-10ml 2N HCl溶解定溶到100ml；上述所有百分比均以重量计。