[发明专利]一种杨树利用甘露糖选择标记基因的遗传转化方法

摘要

本发明公开了一种杨树利用甘露糖选择标记基因的遗传转化方法，该方法包括从甘露糖标记基因表达载体的构建、受体材料的选择、培养基及培养条件的筛选等方面建立杨树利用甘露糖选择标记基因的高效遗传转化技术系统。本发明的方法在短时间内可选育杨树具生物安全的转基因新品种及与其它选择标记基因表达载体结合使用进行多个目的基因的遗传转化。

主权项

1、一种杨树利用甘露糖选择标记基因的遗传转化方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)6-磷酸甘露糖异构酶基因的PCR扩增；(2)甘露糖选择标记基因表达载体的构建并转入农杆菌；(3)将杨树试管苗置于基本培养基MS上继代繁殖；(4)在继代的试管苗上选取幼嫩、平展的叶，剪去叶边缘，剪成预定面积的叶盘为外植体，接种于叶盘分化培养基T上预培养；(5)挑取步骤(2)得到的农杆菌菌落接种到农杆菌液体培养基中，振荡培养一段时间后，取预定体积转接至农杆菌液体培养基，待菌体进入指数生长期，通过离心得到菌体，取基本培养基MS液体培养基悬浮菌体，获得侵染菌液；(6)将步骤(4)的预培养后的叶盘浸入步骤(5)的侵染菌液，振荡，浸泡后，除去多余菌液，放回添加了乙酰丁香酮的叶盘分化培养基T上进行共培养；(7)对共培养后的叶盘转移到叶盘分化筛选培养基W上培养，直至分化出不定芽；(8)将不定芽连同外植体一同移入不定芽伸长筛选培养基Y继代培养；(9)待不定芽伸长至一定长度，将每个不定芽分离独立移入生根筛选培养基G，直至形成完整植体。