[发明专利]利用荧光光素酶和FMN:NADH氧化还原酶进行重金属汞定量检测

摘要

本发明的目的是利用一株来源于海洋环境的发光细菌菌株Photobacterium leiognathi YL(鳆发光杆菌YL)胞内荧光光素酶和FMN:NADH氧化还原酶进行汞的定量检测。本发明分离纯化出一株来源于海洋环境的发光细菌YL为革兰氏阴性杆菌，被鉴定为鳆发光杆菌(Photobacterium leiognathi)。该菌株于2006年12月27日委托中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏号为M 206139。该菌株的16S rDNA基因序列已经提交GenBank核酸序列数据库，存取号为EF017227。本发明通过提取发光细菌胞内荧光光素酶和FMN-NADH氧化还原酶粗酶制剂，建立一种荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶体外发光的体系，实现了荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶双酶体系在活体细胞外的表达，通过重金属汞对双酶体系发光的抑制来测定汞的浓度。本发明实现了荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶在活体细胞外的表达，构建了荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶体外发光体系。该体系发光性能稳定，发光强度高，底物配比简便可行，并可实现汞的定量检测。利用本发明检测汞具有成本低、操作简便、灵敏度高等特点，能够满足汞的快速定量检测的需要。

主权项

1一种利用海洋发光细菌Photobacterium leiognathi YL菌株胞内荧光光素酶和FMN:NADH氧化还原酶进行重金属Hg定量检测的方法。其双酶体系特征是：(1)最佳底物配比：十二烷醛100μL(27mM)、FMN-Na53μL(10mM)和NADH 200μL(0.14mM)，体系pH 7.0。(2)发光检测在微弱发光仪中进行，检测条件是：设置波长474nm，1mL酶液中，快速加入各底物，立刻进行定时跟踪测定，连续测定间隔时间为1s。其检测体系特征是：提取发光细菌胞内产物作为荧光光素酶和FMN-NADH氧化还原酶粗酶制剂进行重金属汞的定量测定；反应温度为4℃，反应时间为15min。