[发明专利]产棒曲霉素真菌环介导等温扩增快速检测方法无效
申请号: | 200810157905.4 | 申请日: | 2008-10-15 |
公开(公告)号: | CN101381773A | 公开(公告)日: | 2009-03-11 |
发明(设计)人: | 雷质文;贺楠;房保海;李正义;唐静;马维兴;张健;祝素珍;贾俊涛;赵丽青;姜英辉;刘云国 | 申请(专利权)人: | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04 |
代理公司: | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 | 代理人: | 张中南 |
地址: | 266002*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明涉及一种产棒曲霉素真菌环介导等温扩增快速检测方法。其中的试剂包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂;其中的反应液含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5-ATATGCATTGGTGACGCTGCGG-ATGGTGATTGCTTTCCCTGA-3、下游内引物5-GACTGGGAGAACAGTTTCGCGA-ACTTTTCCAAGTACGGGGTG-3、上游外引物5-TCGGACGAATTGACGTGATT-3、下游外引物5-TGAAGGAGCTCTGCACGATA-3和甜菜碱;检测产棒曲霉素真菌的方法包括真菌DNA的提取、产棒曲霉素真菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。 | ||
搜索关键词: | 曲霉 真菌 环介导 等温 扩增 快速 检测 方法 | ||
【主权项】:
1. 环介导等温扩增检测产棒曲霉素真菌的试剂,其特征是该试剂包括(1)-(4):(1)环介导等温扩增反应液:包括10×Thermopol反应缓冲液、1.0—1.4mmol/L dNTP、4—8mmol/L硫酸镁、0.8—1.6μmol/L上游引内物、0.8—1.6μmol/L下游内引物、0.2—0.3μmol/L上游外引物、0.2—0.3μmol/L下游外引物和1—1.5mol/L甜菜碱;其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷—盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1%曲拉通X—100;其中上游内引物:5-ATATGCATTGGTGACGCTGCGG-ATGGTGATTGCTTTCCCTGA-3;下游内引物:5-GACTGGGAGAACAGTTTCGCGA-ACTTTTCCAAGTACGGGGTG-3;上游外引物:5-TCGGACGAATTGACGTGATT-3;下游外引物:5-TGAAGGAGCTCTGCACGATA-3;(2)UNG酶:1U/μL;(3)Bst DNA聚合酶:8U/μL;(4)显色剂:为10%的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。
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