[发明专利]蛋白质的测定方法与蛋白质检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种蛋白质测定方法，该方法利用酶比色法及酶联法技术测定蛋白质含量。本发明还涉及蛋白质测定试剂盒。本发明的测定方法具有专一特异性、灵敏度高、误差小，因此本发明的测定方法与试剂盒可以广泛地应用于含有蛋白质的各种产品，尤其是食品的分析。

主权项

1、一种蛋白质的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下：A、样品准备：1)标准样品的制备将一定量的纯蛋白溶于水或缓冲液中，再将蛋白浓度调整到10-100克/升，得到的溶液作为标准样品；2)待测样品预处理以重量计按照1/5-1/500比将固体样品溶于水或缓冲液中作为待测样品；液体样品作为待测样品可以直接用于后续步骤；3)空白样品所述的水或缓冲液作为空白样品，其蛋白质浓度为0克/升；B、试剂溶液的制备：分别移取或称取缓冲液、稳定剂、氨基酸脱氢酶、蛋白酶、辅酶，然后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分别是40-500mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、0.2-5mmol/L；其中所述的蛋白酶是一种或多种选自菠萝蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、α，β，γ，δ-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、无花果蛋白酶、激肽释放酶、金属内肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、内肽酶、N-外肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶；所述的辅酶是一种或多种选自NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺的辅酶；C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/300进行混合，在温度36-38℃下反应2-12分钟，在主波长340nm与副波长405nm下进行测定，测定其吸光度随时间的变化；D、在与步骤C)同样的条件下测定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化；E、在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)使用的水或缓冲液作为空白溶液的吸光度随时间的变化；F、数据处理由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到蛋白质的含量：式中：△A(样品)表示步骤C)得到的待测样品的吸光度变化；△A(标准)表示步骤D)标准样品的吸光度变化；△A(空白)表示步骤E)得到的空白溶液的吸光度变化。