[发明专利]一种检测中药材抗流感病毒活性的方法

摘要

本发明是一种检测中药材抗流感病毒活性的方法，属于对中药材生物活性进行检测的技术领域。本发明所述的方法包括流感病毒神经氨酸酶(NA)原酶液的制备和中药材样品的制备，通过设置样品测试组、背景对照组和酶活性对照组来获得荧光检测样品，根据化合物4-methylumbelliferyl-D-N-acetylneuraminate(MUNANA)是NA的特异性底物，在NA作用下的产物7-Hydroxy-4-methylcoumarin(4MU)在355nm入射波长激发下，可以产生460nm荧光，如果反应体系中加入能够抑制NA活性的药物，则随着荧光产物4MU生成的减少，所检测到的荧光强度会相应减弱，从而该药物的NA抑制活性就能通过荧光强度的变化被表征的原理，对中药材的抗流感病毒活性进行测定。

主权项

1、一种检测中药材抗流感病毒活性的方法，它包括以下步骤：a、NA原酶液的制备：用含1g·L-1牛血清白蛋白和5mg·L-1胰酶的细胞维持液将流感病毒稀释10倍后加入到MDCK单层细胞的细胞培养瓶中，于37℃、5％CO2条件下培养2天后，于-70℃冻存，反复冻融2次后在4℃、800g·min-1条件下离心10min，取上清液，加入0.1％(W/V)NP-40，分装置-70℃保存备用；b、中药材样品的制备：将中药材粉碎后，加8-10倍量的溶媒进行提取后过滤，取滤液，回收溶媒获得提取物，将所得提取物溶解后微孔滤头除菌，备用；c、设置样品测试组：将上述步骤a和b中获得的物质以1：1的体积比混合后，室温下作用30min后加入相同体积的MUNANA，37℃下孵育60min后加入终止液终止反应；d、设置背景对照组：按步骤b中各溶液的体积比将步骤b中获得的中药材样品与MUNANA混合后用buffer补足至与步骤c相同的体积；e、设置酶活性对照组：按步骤b中各溶液的体积比将步骤a中获得的NA原酶液与MUNANA混合后，待反应结束后加入样品溶液；f、将步骤c、d、e获得的反应液用荧光酶标检测仪进行检测后，按下式获得抑制率I；g、对步骤b中中药材样品的剂量和步骤f中抑制率I的数据用量反应平行线测定法进行处理，获得中药材样品的生物效价。