[发明专利]一种从鱼油中富集n－3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法

摘要

一种从鱼油中富集n－3多不饱和脂肪酸(n－3PUFA)甘油酯的方法，属于食品生物及功能保健品技术领域。本发明以鱼油为原料，用化学水解法水解鱼油，并通过分离纯化，从水解鱼油中分别获得高纯度的二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)，再以甘油和纯化的EPA或DHA为原料，利用脂肪酶在有机相中分别催化合成EPA甘油酯或DHA甘油酯产品。产品中主要为n－3PUFA甘油三酯，产品纯度较高，EPA甘油酯中EPA甘油三酯浓度为93％～95％，DHA甘油酯中DHA甘油三酯浓度为92％～94％。本发明制备的高纯度的EPA甘油三酯及DHA甘油三酯产品，很好地改善了天然鱼油产品不同保健功效的应用针对性，提升了鱼油产品的功能保健价值。

主权项

1.一种从鱼油中富集n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法，其特征是以精制鱼油为原料，先采用化学水解法水解鱼油获得n-3多不饱和脂肪酸，然后通过色谱层析方法从n-3多不饱和脂肪酸混合液中分离纯化制备二十碳五烯酸EPA和二十二碳六烯酸DHA，最后以甘油和纯化的EPA，及甘油和纯化的DHA为底物，用脂肪酶分别催化合成EPA甘油酯及DHA甘油酯产品，步骤为：(1)鱼油的化学水解准确称取精制鱼油样品，加入NaOH乙醇水溶液，乙醇∶水体积比为6～9∶1，充氮保护，在50～60℃条件下皂化60～90min，加入正己烷萃取未皂化物，水化层用3mol/L的HCl酸化，然后用正己烷萃取水解出来的游离n-3多不饱和脂肪酸，水洗至中性，过无水Na2SO4，N2吹干溶剂得到油状的n-3多不饱和脂肪酸；(2)EPA及DHA的分离纯化将鱼油水解后得到的含EPA和DHA的n-3多不饱和脂肪酸混合液上C18柱进行层析分离，流动相为甲醇/水，70％～100％甲醇梯度洗脱，洗脱液进行分部收集，采用质谱对层析样品进行快速分析，并利用HPLC检测收集液的EPA纯度、及DHA纯度，经反复层析分离后制得纯化的EPA产品、及DHA产品，其EPA纯度为92％～94％，DHA纯度为93％～95％；(3)脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯以甘油和制备得到的EPA、及甘油和DHA为底物，有机相脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯∶正己烷与EPA或DHA比例以mL/g计为10～20∶1，EPA或DHA与甘油的重量比为1～1.4∶1，脂肪酶Novozym 435添加量为EPA或DHA重量的20％～30％，充氮保护，在40～50℃条下150rpm振荡水浴进行酯化反应，反应12～24h后添加EPA或DHA重量1～1.5倍量的分子筛除去反应生成的水份，反应48h后得到合成产物EPA甘油酯或DHA甘油酯；EPA甘油酯及DHA甘油酯的酯化率均达到93％～96％，其中，EPA甘油酯中甘油三酯含量为93％～95％，DHA甘油酯中甘油三酯含量为92％～94％。