[发明专利]一种用电化学活性开关适配体信标检测蛋白的方法

摘要

一种用电化学活性开关适配体信标检测蛋白的方法，属于化学分析方法的技术领域，包括电化学活性开关适配体信标的合成和检测样品中特定蛋白分子的两个步骤。所述的适配体信标无电化学活性，但与目标分子结合后，因其茎环结构发生改变而具有电化学活性，产生与溶液中的蛋白的浓度呈线性关系的氧化峰电流。由此还可计算蛋白分子的含量。该方法以电化学活性开关适配体信标为检测探针，无试剂，不需要固定，选择性好、灵敏、简便、快速直接均相测定适配体等生物分子，检测的线性范围宽，特别适于检测目标量变化大的样品和野外等简陋场合使用。

主权项

1、一种用电化学活性开关适配体信标检测蛋白的方法，其特征在于，具体操作步骤：第一步电化学活性开关适配体信标的合成每1. 0 O.D核酸适配体量合成时取30μL 3.3×10-3molL-1的胭脂红酸溶液和加入20mg咪唑，调节该溶液的pH值6.5，室温下羧基活化30分钟，在偶联剂12mg EDC和27mg NHS存在下，加入含1.0 O.D两端修饰有氨基的具有茎环结构特定序列核酸的PBS溶液，调节该PBS溶液的pH值至7.3和溶液体积为400μL，在冰水浴下搅拌24小时，透析袋于PBS溶液中透析48小时，去除未与核酸偶联的胭脂红酸，用HPLC方法提纯，得到浓度不低于1×10-5molL-1的电化学活性开关适配体信标，4℃冰箱中保存备用；第二步检测样品中特定蛋白分子在含有待测的特定蛋白分子溶液的样品中，加入50μL1×10-5molL-1的第一步得到的电化学活性开关适配体信标，控制溶液的培育条件为PBS溶液的pH＝7.3、[Mg2+]＝1.0mmol/L和[Na+]＝1.0mol/L，37℃下培育30分钟，电化学检测以PBS溶液为电解液，采用羧基化的碳纳米管修饰电极为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂电极为对电极，用示差脉冲伏安法(DPV)进行检测，在0.2～0.9V范围扫DPV，记录0.72V处的氧化峰电流值，该氧化峰电流与样品中特定蛋白分子浓度呈线性关系。