[发明专利]调控调节性T细胞和Th17细胞相互转化的药物筛选方法

摘要

本发明提供了一种调控调节性T细胞和Th17细胞相互转化的药物筛选方法，步骤为：将Foxp3-GFP表达质粒转染入293T细胞中，加入待筛选药物，检测Foxp3 mRNA的表达，筛选出具有上调Foxp3 mRNA的药物；培养小鼠幼稚性T淋巴细胞，加入药物，检测Foxp3 mRNA的表达，筛选出上调该基因表达的药物，并进一步验证该药能上调CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺在CD4⁺T细胞中的百分率；培养小鼠幼稚性T淋巴细胞，加入细胞因子诱导向Th17细胞转化，加入药物，检测Th17细胞核转录因子RORγt mRNA的表达，筛选出下调该基因表达的药物，并进一步验证该药能下调CD4⁺IL-17⁺在CD4⁺T中的百分率。本发明采用体外筛选方式、药物用量少、时间短、可靠性高、应用前景广。

主权项

1. 一种调控调节性T细胞和Th17细胞相互转化的药物筛选方法，其特征在于，具体步骤为：第一步：将叉状头/翅膀状螺旋转录因子绿色荧光蛋白表达质粒转染入人肾上皮细胞中，通过荧光显微镜观测转染入的质粒是否表达，加入不同的待筛选药物，20-30小时后通过实时定量聚合酶联反应检测叉状头/翅膀状螺旋转录因子mRNA的表达，筛选出具有上调叉状头/翅膀状螺旋转录因子表达的药物；第二步：培养小鼠幼稚性T淋巴细胞，加入第一步筛选得到的药物，60-80小时后实时定量聚合酶联反应检测叉状头/翅膀状螺旋转录因子mRNA的表达，筛选出上调该基因表达的药物，并进一步通过流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+在CD4+T细胞中的百分率，验证该药物在蛋白水平上的作用；第三步：培养小鼠幼稚性T淋巴细胞，加入转化生长因子-β和白细胞介素—6诱导向Th17细胞转化，同时加入通过第二步筛选得到的药物，60-80小时后通过实时定量聚合酶联反应检测Th17细胞核转录因子孤核受体γtmRNA的表达，筛选出下调该基因表达的药物，并进一步通过流式细胞仪检测CD4+IL-17+在CD4+T细胞中的百分率，验证该药物在蛋白水平上的作用。