[发明专利]环介导恒温扩增检测米氏凯伦藻的方法

摘要

环介导恒温扩增检测米氏凯伦藻的方法，涉及米氏凯伦藻检测，本发明取微藻DNA进行PCR扩增，测序，其目的是对米氏凯伦藻设计4条特异性引物，4条引物序列如下：引物Primer 序列Sequence(5’-3’)F3 CTGTCATCTTGTCATGTGC；B3 CTAACTTCATGTCATGGAAGG；FIP(Flc+F2) TTCAATGCATCAGGGGCAGG-GCAACTGACAGCAGTGTG；BIP(Blc+B2) ACACCTTGTGCTTTGTGTGT-TGAAGTGGCAGACAGGAG。

主权项

环介导恒温扩增检测米氏凯伦藻的方法，首先提取微藻基因组DNA，以其为模板进行PCR扩增，PCR扩增后对产物进行测序并比对，其特征是针对米氏凯伦藻核糖体间隔区的6个区域设计4条特异性引物，根据LAMP产物产生白色焦磷酸镁沉淀或LAMP产物与SYBRGreen I反应呈现绿色判断为米氏凯伦藻，所述的4条特异性引物序列如下：引物Primer 序列Sequence(5’-3’)F3 CTGTCATCTTGTCATGTGC；B3 CTAACTTCATGTCATGGAAGG；FIP(F1c+F2) TTCAATGCATCAGGGGCAGG-GCAACTGACAGCAGTGTG；BIP(B1c+B2) ACACCTTGTGCTTTGTGTGT-TGAAGTGGCAGACAGGAG；内引物FIP和BIP的浓度均为1.6μM，外引物F3和B3的浓度均为0.2μM，6mM MgSO4，0.6mM dNTP，0.6M Betaine，反应温度为63℃，反应时间60min。