[发明专利]一种功能菌群在水处理系统中稳定性的检测方法

摘要

一种功能菌群在水处理系统中稳定性的检测方法，它涉及一种功能菌群的检测方法。它解决了目前检测水处理系统中功能菌群稳定性的方法存在无法确定微生物的菌种，检测耗时长、耗费高，及检测结果易失真的问题。检测方法：一、提取生物水处理系统中微生物基因组总DNA；二、用16s rDNA V3区通用引物进行PCR扩增；三、PCR产物与水处理系统功能菌群标准样品同步进行DGGE分析。本发明方法能够确定被测微生物的菌种，保证了检测结果的可靠性，其检测结果能更为合理和有效的指导水处理系统工艺，确保水处理系统出水水质。本发明方法检测耗费低，且检测时间短；而且本发明方法检测结果好，条带明亮清晰，不易失真。

主权项

1、一种功能菌群在水处理系统中稳定性的检测方法，其特征在于功能菌群在水处理系统中稳定性按以下步骤进行检测：一、提取生物水处理系统中微生物基因组总DNA；二、用16s rDNA V3区通用引物进行PCR扩增；三、PCR产物与水处理系统功能菌群标准样品同步进行DGGE分析，即得出检测结果；其中步骤三中水处理系统功能菌群标准样品按以下步骤获得：a、水处理系统功能菌培养后分别固定于活性炭上；b、分别提取水处理系统功能菌基因组总DNA；c、用16s rDNA V3区通用引物进行PCR扩增；d、取每株功能菌PCR产物100μL混合，然后用核酸共沉剂将DNA沉淀析出，冷冻干燥后-20℃保存，使用前溶解于100μL TE缓冲溶液或无菌去离子水中，制成样品；e、样品与全部单一功能菌同步进行DGGE分析，样品条带与单一功能菌条带一一对应为水处理系统功能菌群标准样品；步骤二中16s rDNA V3区通用上游引物BSF338的碱基序列为：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’，16s rDNA V3区通用下游引物BSR534的碱基序列为：5’-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3’；步骤二中16s rDNA V3区通用引物PCR反应体系为50μL，其中上游引物的浓度为0.5μmol/L、下游引物的浓度为0.5μmol/L、dNTP的浓度为200μmol/L、模板为50ng、10×PCR Buffer缓冲液为12.5μL、Pfu DNA聚合酶为2.5U以及余量的无菌纯水；步骤二中16s rDNA V3区通用引物PCR反应条件：94℃预变性5min，然后20个循环的降落PCR，94℃变性30s、退火温度由65℃开始、每2个循环退火温度降低1℃、退火1min、20个循环后退火温度为55℃、72℃延伸1min，之后10个循环94℃变性1min、55℃退火min、72℃延伸1min，最后72℃延伸5min；步骤三中水处理系统功能菌群标准样品的制备步骤c中16s rDNA V3区通用上游引物BSF338的碱基序列为：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’，16s rDNA V3区通用下游引物BSR534的碱基序列为：5’-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3’；步骤三中水处理系统功能菌群标准样品的制备步骤c中16s rDNA V3区通用引物PCR反应体系为50μL，其中上游引物的浓度为0.5μmol/L、下游引物的浓度为0.5μmol/L、dNTP的浓度为200μmol/L、模板为50ng、10×PCR Buffer缓冲液为12.5μL、Pfu DNA聚合酶为2.5U以及余量的无菌纯水；步骤三中水处理系统功能菌群标准样品的制备步骤c中16s rDNA V3区通用引物PCR反应条件：94℃预变性5min，然后20个循环的降落PCR，94℃变性30s、退火温度由65℃开始、每2个循环退火温度降低1℃、退火1min、20个循环后退火温度为55℃、72℃延伸1min，之后10个循环94℃变性1min、55℃退火min、72℃延伸1min，最后72℃延伸5min。