[发明专利]一种以橙色大白菜子叶段为外植体的离体组织培养方法

摘要

本发明公开了一种以橙色大白菜子叶段为外植体的离体组织培养方法。该方法在传统大白菜组织培养的基础上首次采用了芽启动培养基和对子叶段末端的切割措施，优化了橙色大白菜离体植株再生体系。该培养方法不需要添加AgNO₃、简单、易操作、成本低；同时，培养出来的不定芽质量好、健壮、没有畸形，提高了再生频率，缩短了再生周期。为获得大白菜转基因的受体新材料提供了新的途径，对利用现代基因工程技术创新大白菜种质和新品种将具有重要的现实意义。

主权项

1. 一种以橙色大白菜子叶段为外植体的离体组织培养方法，其特征在于，包括下列步骤：1)挑选籽粒饱满的橙色大白菜种子，无菌条件下，先用体积百分比为70％的酒精表面杀菌约1min，再用10％的NaClO溶液灭菌30～35min，然后用无菌水反复冲洗4～5次，最后将种子平放于MS基本培养基表面，在温度为25±1℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx的条件下培养；2)当幼苗直立生长，两片子叶较大、半直立将展平、呈绿色，第一片真叶未露出时，在子叶柄基部和下胚轴交接处横切，后沿子叶柄纵切去除顶芽，并切除此子叶顶端的1/3的单片子叶为外植体；3)先将子叶段以子叶的下端竖直向下插入芽启动培养基中，培养2～3d，然后转入芽诱导培养基中培养10d，当不定芽长到2～3cm时，最后将诱导的不定芽转入生根培养基中培养，以上培养条件均为温度25±1℃，光照时间16h/d，光照强度2000lx；4)待幼苗基部形成大量的毛根后，炼苗4～5d，取出小植株，洗净根部培养基，移栽到珍珠岩∶草炭体积比为1∶3混合基质中，塑料薄膜保湿7d，逐渐揭膜，10～15d即可入土栽培。