[发明专利]以树鼩CD81基因构建的质粒为标准品的Taqman探针荧光定量PCR方法无效
| 申请号： | 200810233735.3 | 申请日： | 2008-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN101691602A | 公开（公告）日： | 2010-04-07 |
| 发明（设计）人： | 夏雪山;冯悦;赵文华;刘丽;魏大巧 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 昆明今威专利代理有限公司 53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650093 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种检测和评价树鼩被HCV(丙型肝炎病毒)体内、体外感染前后CD81分子变化情况的方法，更具体的说，涉及一种以克隆的树鼩CD81质粒为标准物，在此基础上建立的以Taqman探针荧光定量PCR的检测方法。属于分子生物学领域.。该方法包括对树鼩CD81基因片段的克隆；在克隆的CD81基因片段上利用Primer Express2.0软件设计合理的探针和引物；设计实验找到最优条件下的退火温度(Tm值)、引物浓度、探针浓度；进一步以树鼩CD81质粒为标准品以10倍梯度稀释建立了标准曲线；并且验证了该方法重复性、稳定性和灵敏性。最后用该检测体系，对HCV体外感染的树鼩原代肝细胞样品CD81的变化情况进行了检测。该方法可以准确、快速、便捷的检测出树鼩CD81的变化情况。 | ||
| 搜索关键词： | cd81 基因 构建 质粒 标准 taqman 探针 荧光 定量 pcr 方法 | ||
【主权项】：
一种以树鼩CD81基因构建的质粒为标准品的Taqman探针荧光定量PCR方法，包括对树鼩CD81基因片段的克隆并测序，通过T-A克隆技术构建了PMD-18T-CD81质粒，以克隆的树鼩CD81基因片段为目标，设计Taqman PCR引物和探针，设计实验找到最优条件下引物的退火温度、引物浓度、探针浓度，提纯该质粒并计算CD81基因片段拷贝数，以计算好的质粒用10倍梯度稀释，配制拷贝数为103～107copies阳性质粒建立标准曲线，用该检测体系对HCV体外感染的树鼩原代肝细胞样品CD81的变化情况进行检测。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于昆明理工大学，未经昆明理工大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200810233735.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
