[发明专利]一种水产品中恩诺沙星残留的一步式免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种水产品中恩诺沙星残留的一步式免疫检测方法，该方法利用生物免疫技术制备特异性多克隆抗体；将制备的特异性抗体与辣根过氧化物酶结合形成酶标记抗体；以96孔聚苯乙烯板为固相载体，事先以相应的完全抗原进行包被、载体蛋白进行封闭；检测时同时以不含有待测物的提取液制备阴性对照，以恩诺沙星标准品的梯度溶液建立标准曲线；利用常规ELISA检测其吸光值并计算相应的抑制率，进而根据标准曲线测定样品中待测物的浓度。本发明灵敏度高、准确性好，可以满足相关标准的检测要求；操作简便快速，有效缩短了分析时间，可应用于恩诺沙星残留的现场快速筛选检测。

主权项

1. 一种水产品中恩诺沙星残留的一步式免疫检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)首先利用生物免疫技术制备恩诺沙星特异性多克隆抗体；(2)以制备的特异性抗体与辣根过氧化物酶结合形成酶标记抗体；(3)以96孔聚苯乙烯板为固相载体，包被相应完全抗原并进行封闭处理；(4)对待测样品中的恩诺沙星残留进行分离提取；(5)将样品提取液、酶标记抗体液同时加入96孔板中，进行反应后利用酶标仪测定OD450值；(6)同时以不含有待测物的提取液代替样品液作为阴性对照，以恩诺沙星标准品的梯度稀释液代替样品液建立标准曲线；(7)样品与阴性对照进行比较，引起吸光值降低10％以上即判断为阳性样品，即含有待测药物残留，否则为阴性样品；并根据恩诺沙星标准品的梯度曲线进行回归分析测定待测样品中药物残留的浓度。