[发明专利]一种川附子组织培养及快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种川附子组织培养及快速繁殖方法，包括：外植体的选择与消毒灭菌、接种诱导愈伤组织、诱导丛生芽、诱导生根、炼苗移栽等主要步骤，通过以川附子茎尖、叶片、根、茎段、叶柄和种子等为外植体进行组织培养、诱导植株再生快速繁殖川附子种苗，其诱导率、分化率及生根率较高，移入栽培土后成活率高；可有效解决川附子生产中现行品种的抗病性差、产量低而不稳、品种混杂等问题，通过茎尖脱毒及利用组织培养手段等实现品种的提纯复壮，提供川附子优良品种，为川附子GAP基地等所需大量优质种苗的工厂化、规模化生产奠定良好的基础。

主权项

一种川附子组织培养及快速繁殖方法，其特征在于：第一步：外植体的选择与消毒三月份选取一年生健壮川附子植株的茎尖、叶片、根、茎段、带腋芽的茎段、叶柄、或者上一年收取的种子为外植体，低温4℃处理3天；用自来水冲洗干净，用70～75％酒精处理15～20s，0.1％升汞液浸泡10～12min，倒去升汞液，用无菌水换洗4～5次；将茎尖剥离后切成0.2mm长，根、茎段、带腋芽的茎段及叶柄切成1.3～1.7cm，叶片切成1cm×1cm大小，待用；第二步：接种、诱导愈伤组织以MS为基本培养基，在基本培养基中附加NAA 0.1～0.2mg/L+6 BA 1.0～4.0mg/L作为诱导愈伤组织的培养基，将上述第一步处理好的外植体按常规方法接种进行愈伤组织诱导，黑暗培养28～32天，得到愈伤组织；第三步：诱导丛生芽在MS基本培养基中附加NAA 0.1～0.2mg/L+6 BA 2.0～2.5mg/L作为分化培养基诱导丛生芽，将上述第二步获得的愈伤组织转接到该分化培养基上，进行丛生芽诱导，光照培养28～32天，诱导出丛生芽；第四步：诱导生根在MS基本培养基中附加IBA 1.0mg/L+AC 3.0g/L 1；适合愈伤组织增殖与丛生芽诱导的培养基为：MS+NAA 0.2mgL+ 1PVP 3.0g/L作为生根培养基，将上述第三步长至3～5cm左右的丛生芽转接到该生根培养基上诱导根的形成，培养时间为20～25天，得到生根的试管苗；第五步：炼苗移栽待上述第四步的试管苗在生根培养基上培养至根长4～5cm、植株6～7cm，选择健壮幼苗打开瓶盖进行炼苗，室温炼苗2～3天后，用自来水洗净苗上的培养基，移栽至用0.1％多菌灵处理过的腐质土和珍珠岩混合基质中，置于温度22±1℃，光照周期12h/d，光照强度1500～2000lx的生长室内，薄膜覆盖，保持环境湿润，一周后去掉薄膜转入大田栽培。