[发明专利]猪瘟间接血凝检测试剂盒及制备方法

摘要

本发明涉及一种重组蛋白制备方法及用这种蛋白制备猪瘟间接血凝检测试剂盒及方法。其蛋白制备方法是从猪瘟病毒(CSFV)基因的保守区中选取一段与牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVDV)基因同源性低于35％对应氨基酸为A1的核苷酸序列S1，再将其中的第4个氨基酸改变为亲水性氨基酸，得到氨基酸A2，再对A2对应的核苷酸序列S2进行改变，分别得到另外3段新的核苷酸序列，用联接核苷酸顺序串联，得到序列S9，其对应的氨基酸序列为A3，经相应处理后得到核苷酸序列S10，将S10人工合成、酶切、与载体pGEX-4T-1连接，重组载体导入大肠杆菌诱导表达，从表达产物中分离纯化得到重组蛋白。

主权项

1、一种猪瘟抗原重组蛋白的制备方法，其特征是从猪瘟病毒(CSFV)基因的保守区中选取一段与牛病毒性腹泻—粘膜病病毒(BVDV)基因同源性低于35％、其中至少包括1个能刺激动物机体产生中和抗体的抗原位点的60个核苷酸的序列S1，其对应的氨基酸序列为A1，且所选择的核苷酸序列S1中的密码子应尽可能地不存在稀有密码子或亚稀有密码子，再将其中的第4个氨基酸改变为亲水性氨基酸，得到氨基酸A2，然后在不改变氨基酸序列的情况下对其对应的核苷酸序列S2进行改变分别得到另外3段与编码氨基酸A2的密码子不同，并尽可能地避免了稀有密码子或亚稀有密码子出现的，而且为大肠杆菌所偏爱的新的核苷酸序列S3、S4、和S5，选用其编码的氨基酸自身内以及与氨基酸A2的单个氨基酸间均不形成共价键的联接核苷酸S6，尽可能地避免稀有密码子出现以及核苷酸序列尽量不重复的原则下进行人为改变得到联接核苷酸S7和S8，将S2、S6、S3、S7、S4、S8、S5依次串联，得到序列S9，其对应的氨基酸序列为A3，在序列S9前面添加限制性内切酶位点BamH I及保护性碱基，在后面添加限制性内切酶位点Xho I及保护性碱基，所得核苷酸序列S10，将序列S10进行人工合成，然后将其用BamH I和Xho I进行双酶切，得到的目的基因片段与同样用BamH I和Xho I进行双酶切后得到的载体pGEX-4T—1序列进行连接，然后将重组载体导入大肠杆菌进行诱导表达，从表达产物分离纯化得到重组蛋白。