[发明专利]一种快速的利用基因重组酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法

摘要

本发明公开了一种快速的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法。采用的技术方案是：在野生型酿酒酵母的朊病毒PSI⁺的编码基因SUP35上，插入荧光标签GFP基因，得到荧光标记[PSI⁺]朊病毒的[GPSI⁺]酵母细胞；然后经[GPSI⁺]酵母细胞的活化、[GPSI⁺]酵母细胞初始OD值的调试、筛选待测药物后，用荧光显微镜实时观察待测药物对[GPSI⁺]酵母细胞中朊病毒的作用效果。本发明具有快速以及能够在活体中实时定量的观察药物对于朊病毒的治疗作用的优点，为在更大范围内的寻找抗朊病毒的药物奠定了基础。

主权项

1、一种快速的利用基因重组酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法，其特征在于步骤如下：1)[GPS1+]酵母细胞的制备：在野生型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)内的朊病毒[PS1+]的编码基因SUP35上，将荧光标签GFP基因插在N和M结构域中间，使基因编码的Sup35p由NMC转变为NGMC，得到荧光标记[PS1+]朊病毒的[GPS1+]酵母细胞，其菌落颜色为浅粉色；2)筛选抗朊病毒药物：[GPS1+]酵母细胞的活化：取[GPS1+]酵母细胞接入1/2YPD培养液中，30℃振荡过夜培养；[GPS1+]酵母细胞初始OD值的调试：调制[GPS1+]酵母细胞悬液OD600＝0.5；筛选待测药物：取无菌冻存管，分别加入待测药物、1/2YPD培养液以及调试好的[GPS1+]酵母细胞悬液，在24℃的条件下，振荡培养，每天定时取前一天冻存管中的[GPS1+]酵母细胞放入新的装有1/2YPD培养液和待测药物的无菌冻存管中，振荡培养1～5天；检测：用荧光显微镜，观察药物作用的[GPS1+]酵母细胞中朊病毒的状态。