[发明专利]人补体片段C5a基因及其克隆、重组蛋白表达方法无效
| 申请号： | 200910011854.9 | 申请日： | 2009-06-04 |
| 公开（公告）号： | CN101906416A | 公开（公告）日： | 2010-12-08 |
| 发明（设计）人： | 李庆伟;吴芬芳;张宁;王华颖 | 申请（专利权）人： | 辽宁师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/435;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 116029 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及人补体片段C5a在大肠杆菌表达系统中的克隆和表达，以及表达产物的纯化和生物活性。包括：根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成一组引物，通过重叠PCR的方法获得C5a的DNA片段，将其克隆于硫氧还蛋白融合表达载体pET32a中，表达的融合蛋白以胞浆可溶性蛋白的形式存在。通过Ni2+亲和层析、肠激酶酶切和进一步纯化，得到高纯度的C5a蛋白。该蛋白对人中性粒细胞具有明显的趋化活性，能刺激人中性粒细胞呼吸爆发和分泌乳铁蛋白，并能诱导人单核细胞分泌IL-8。 | ||
| 搜索关键词： | 补体 片段 c5a 基因 及其 克隆 重组 蛋白 表达 方法 | ||
【主权项】：
一组PCR引物，其特征在于它是根据大肠杆菌偏爱密码子设计合成，且由如下核苷酸序列组成：P1：ctgctatgatggcgcgtgcgtgaacaacgatgaaacctgcgaacagcgtgcggcgcgP2：cggtaaacgctttaatgcaacgcgggcccaggctaatacgcgccgcacgctgttcgcP3：aaatcgcggcgaaatataaacatagcgtggtgaaaaaatgctgctatgatggcgcP4：ctaatgttcgcacgcagctggctcgccaccacgcagcattcggtaaacgctttaaP5：cgcggatccaccctgcagaaaaaaattgaagaaattgcggcgaaaP6：ccgctcgagcttattaacggcccagctgcatatctttatggctaatgttcgc
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