[发明专利]一种利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法

摘要

本发明涉及一种利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法，属于生物技术领域。鲜蚯蚓或冷冻蚯蚓加0.14mol/L NaCl、匀浆、搅拌提取、离心上清调节pH7.5-9.5、电导率1-5ml/Ω；加活化的大孔阴离子交换树脂搅拌交换2-4小时，洗涤，3-4mol/L NaCl洗脱；或者树脂装离交柱、动态交换、0.5-4.5mol/L NaCl梯度洗脱；洗脱液冷酒精沉淀或超过滤脱盐、浓缩，低温干燥得蚯蚓纤溶酶。本发明技术产品白色、无异味、易溶于水，生物活性由≥12uku/mg提高到40uku/mg以上，收得率提高10％以上，节约大量化工原料、生产成本降低50％左右。适用于工业化生产。

主权项

1. 利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法，包括：(1)鲜蚯蚓或冷冻蚯蚓，在0.14mol/L NaC1溶液中匀浆并随即搅拌提取，防止数量占绝对优势、pI1.0左右的DNA溶解或被细胞固有的DNA酶降解，随即离心或过滤除去DNA沉淀，得蚯蚓粗提液；(2)无离子水调节蚯蚓粗提液的电导率1-5m1/Ω，再用大孔阴离子交换树脂进行静态或动态离子交换；(3)用2. 5-4.5mol/L pH5-6的NaCl溶液搅拌洗脱纤溶酶，或者0.5-4.5mol/L pH5-6的NaCl溶液梯度洗脱、收集纤溶酶洗脱峰；(4)洗脱液用冷酒精或其它有机溶剂沉淀、有机溶剂脱水、真空干燥，或者洗脱液通过超过滤洗涤、浓缩，冷冻干燥，得蚯蚓纤溶酶；