[发明专利]一种柠檬黄完全抗原的合成方法

摘要

一种柠檬黄完全抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以柠檬黄为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了柠檬黄的人工抗原，合成步骤简洁，有效，完全可用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了必需的人工抗原，可以满足国内对柠檬黄研究的需要。

主权项

1、一种柠檬黄完全抗原的合成方法，其特征是以柠檬黄为半抗原，用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联，用分光光度法测定偶联物的偶联比；步骤为：(1)柠檬黄完全抗原的合成：配制A液：取53.4mg柠檬黄溶于2mL DMSO中，冰浴10min，加入51μL三正丁胺，冰浴10min，加入87μL氯甲酸异丁酯，4℃下，搅拌孵育1h，为A液，4℃保存备用；配制B液：130mg牛血清蛋白BSA溶于2mL 0.01mol/L pH 7.4PBS缓冲液，为B液，4℃保存备用；冰浴条件下把A液逐滴滴加入B液中，边加边摇，于4℃下孵育4h，即得柠檬黄完全抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用。透析：将柠檬黄完全抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01mol/L的pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天，最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得到柠檬黄完全抗原；(2)柠檬黄完全抗原的鉴定：柠檬黄完全抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果，利用牛血清蛋白标准液得到标准曲线，从曲线上比对得到抗原溶液的蛋白浓度，计算摩尔吸光系数ε，再测定柠檬黄完全抗原的偶联比。