[发明专利]一种农杆菌介导的不依赖于组织培养的棉花转基因方法

摘要

本发明涉及一种农杆菌介导的不依赖于组织培养的棉花转基因方法，属于生物技术领域。在棉花授粉当天下午或次日上午，以附加0.05％表面活性剂Silwet L-77和40mgl-1乙酰丁香酮的农杆菌-蔗糖溶液滴涂花柱，保湿两天，收获种子进行抗性鉴定；提取DNA，进行PCR、Southern blot检测。多次处理获得了转基因植株，转化率从0.05％到0.65％不等，证明了农杆菌浸蘸棉花花柱的转化体系的可重复性和可靠性。与传统的依赖于组织培养的转基因方法相比，农杆菌浸蘸棉花花柱的转化方法更为简便、经济和高效，同时还避免了组织培养过程中受棉花基因型限制和容易产生体细胞无性系变异等问题。

主权项

一种农杆菌介导的不依赖于组织培养的棉花转基因方法，包括：1)在棉花授粉当天下午17:00-19:00或授粉次日上午9:00-11:00，以附加体积比0.05％表面活性剂Silwet L-77和40mg l-1乙酰丁香酮、含有目的基因的基因工程农杆菌-蔗糖溶液滴涂棉花花柱；2)套袋遮光保湿两天；3)种子成熟收获后进行转基因功能鉴定和分子检测；4)PCR和Southern杂交验证目的基因已整合至目标棉花基因组中，从而获得转基因棉花植株。