[发明专利]一种细菌厌氧呼吸过程细菌膜内外质子动力的测定方法

摘要

本发明公开了一种细菌厌氧呼吸过程中细菌膜内外质子动力的测定方法，旨在提供一种快速、准确、适用范围广的测定细菌厌氧呼吸过程中细菌膜内外质子动力pmf的方法。本发明的技术方案包括以下步骤：将待测细菌培养至稳定生长期，收集菌体，去除培养基；配置反应液；确定加入反应液中DCCD的用量；测定厌氧呼吸过程中细菌膜内外质子动力。本发明用于环境修复和治理中。本发明主要用于测定细菌厌氧呼吸过程细菌膜内外质子动力，从而表征细菌厌氧呼吸的产能。

主权项

1. 一种细菌厌氧呼吸过程中细菌膜内外质子动力的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(a)将待测细菌培养至稳定生长期，收集菌体，去除培养基；(b)配置反应液：在M9缓冲液的基础上添加待测细菌所需的单一电子供体和单一电子受体，所述的M9缓冲液是含有5.7mmol/L Na2HPO4·12H2O，3.3mmol/L KH2PO4，18.0mmol/L NH4Cl的水溶液；(c)确定加入反应液中DCCD的用量：分别在若干相同体积的(b)步骤配置的反应液中加入不同剂量的二环己基碳二亚胺DCCD，形成若干含有不同浓度DCCD的反应液，使各反应液的DCCD的浓度呈一浓度梯度；在各反应液中分别加入(a)步骤收集的菌体，使各反应液中的菌体浓度相同，在无氧条件下测定各反应液的pH值变化，以pH值出现下降过程最后趋于稳定的反应液的DCCD剂量为测试用量；(d)测定厌氧呼吸过程中细菌膜内外质子动力：在(b)步骤配置的反应液中加入(c)步骤测定的DCCD一种测试用量，所述的反应液的体积与(c)步骤中一种未加入DCCD的反应液的体积相同，由此形成测定反应液，在该测定反应液中加入(a)步骤的收集的菌体，使得菌体浓度与所加入的该种DCCD测试用量的(c)步骤反应液中的菌体浓度相同，在无氧条件下测定反应液的pH值变化，pH值出现降低过程直至稳定不变，测定的pH变化值即为细菌膜内外质子动力。