[发明专利]一种人3号染色体计数探针的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种人3号染色体计数探针的制备方法，还涉及利用人3号染色体计数探针制备一种人3号染色体计数试剂盒，应用本发明的人3号染色体计数探针及相应的试剂盒可以对人3号染色体进行准确、快速的计数。

主权项

一种人3号染色体计数探针的制备方法，其特征在于制备步骤包括：(1)引物设计：人3号染色体着丝粒区域PCR扩增引物设计和验证。(2)克隆质粒制备：配制PCR反应体系，以人基因组为模板进行PCR扩增，将纯化后的目的产物与载体pMD18-T连接，制备出包含目的片段的克隆质粒pMD18-T-C3。(3)C3探针制备：可采用以下两种方法进行制备。方法一：以包含目的片段的质粒pMD18-T-C3DNA为模板，进行PCR扩增，通过PCR反应将氨基修饰的dUTP掺入到目的产物中，然后经过PCR产物纯化、浓缩、定量；对纯化后的PCR产物进行荧光标记、纯化、计算标记效率、定量，而获得C3探针，避光、-20℃储存。方法二：以包含目的片段的质粒pMD18-T-C3DNA为模板，使用荧光素标记的dUTP直接进行PCR扩增，将PCR产物标记荧光，然后进行纯化、计算标记效率、定量，定量，而获得C3探针，避光、-20℃储存。(4)C3探针验证：使用人类正常分裂中期淋巴细胞滴片进行探针验证。