[发明专利]一种提取赤潮甲藻核酸的方法无效
| 申请号： | 200910046877.3 | 申请日： | 2009-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN101824447A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 张凤英;马凌波;石彦红;徐兆礼 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12R1/89 |
| 代理公司： | 上海东方易知识产权事务所 31121 | 代理人： | 欧阳俊立 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种提取赤潮甲藻核酸的方法，涉及赤潮生物核酸提取方法，需要建立一种提取赤潮甲藻核酸的方法，本发明采取藻液，并进行显微镜计数，其特征是取10mL藻液于50mL离心管中，置于100℃沸水浴中，然后分别在不同煮沸时间取样，然后进行显微镜细胞计数，计算破碎率，同时以灭过菌的去离子水做空白对照，检测核酸浓度；算出每毫升藻液中煮沸破碎前数目(N0)和破碎后的数目(N1)，计算破碎率；扩增塔玛亚历山大藻和环状异帽藻ITS序列，取5uL扩增混合物用琼脂糖电泳检验，得到扩增片段，回收该扩增片段并测序、比对后确认扩增序列为目的序列即获得的微藻核酸。本发明用于微藻核酸分子生物学实验。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提取 赤潮 核酸 方法 | ||
【主权项】：
一种提取赤潮甲藻核酸的方法，采取藻液，并进行显微镜计数，其特征是取10mL藻液于50mL离心管中，置于100℃沸水浴中，然后分别在不同煮沸时间10min，30min，60min，90min取样，然后进行显微镜细胞计数，计算破碎率，同时以灭过菌的去离子水做空白对照，检测核酸浓度；显微镜下用血球计数板计数，算出每毫升藻液中煮沸破碎前数目(N0)和破碎后的数目(N1)，按下式计算破碎率：破碎率＝(N0-N1)/N0×100％；以不同时间煮沸获得的藻细胞液为模板，扩增塔玛亚历山大藻和环状异帽藻ITS序列，PCR引物序列为：LH2：5’-AGGTGAACCTGCGGAAGGATC-3’和Diam：5’-CCTGCAGTCGACAKATGCTTAARTTCAGCRGG-3’，扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，塔玛亚历山大藻55℃退火45s，环状异帽藻58℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸7min，取5uL扩增混合物用琼脂糖电泳检验，得到了预期的扩增片段，回收该扩增片段并测序，序列比对后确认扩增序列为目的序列即提取的核酸适合于分子生物学实验。
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