[发明专利]一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法无效
| 申请号： | 200910048020.5 | 申请日： | 2009-03-23 |
| 公开（公告）号： | CN101509028A | 公开（公告）日： | 2009-08-19 |
| 发明（设计）人： | 孟清;周倩 | 申请（专利权）人： | 东华大学 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 201620上海市松*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法，包括：选择目的基因为模板设计引物；配制高、中、低不同程度的d[X]TP易错PCR体系；将配制好的PCR反应体系放入PCR仪中进行PCR扩增；将易错PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳回收，进行酶切、与载体连接、转化，进行阳性克隆筛选，提取质粒；以提取的质粒为模板，进行第二轮易错PCR；利用相应筛选系统进行有用突变的筛选。该方法操作简单，操作简单，突变频率高、产量稳定，可为定向进化蛋白质提供新的思路和途径。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 不同 程度 连续 pcr 进行 定向 进化 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选择目的基因为模板设计引物；(2)配制高、中、低不同程度的d[X]TP易错PCR体系；(3)将配制好的PCR反应体系放入PCR仪中进行PCR扩增；(4)将易错PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳回收，进行酶切、与载体连接、转化，进行阳性克隆筛选，提取质粒，(5)以提取的质粒为模板，重复步骤(1)～(4)进行第二轮易错PCR；(6)重复步骤(5)，利用相应筛选系统进行有用突变的筛选。
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