[发明专利]一种将目的DNA片段插入载体中的方法无效
| 申请号： | 200910051959.7 | 申请日： | 2009-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN101899467A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 肖爱军;邵标;赫英俊 | 申请（专利权）人： | 上海捷瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 胡美强 |
| 地址： | 200233 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种将目的DNA片段插入载体中的方法，包括以下步骤：1)设计并合成扩增目的DNA片断的引物，该引物的最外侧有3～20个碱基与线性载体最外侧完全互补，用该引物扩增得到目的DNA片段；2)将目的DNA片段和线性载体混合，加入同时具有3’端至5’端外切酶活性和同源重组酶活性的重组酶进行反应，得到插入了目的DNA片段的重组载体。本发明具有外切与同源重组的双重功效，在较大范围内(即3～20个碱基)选择PCR产物与线性载体的同源碱基数量，使重组末端碱基数目的选择更加灵活；无需DNA连接酶，只要把目标载体线性化，PCR产物无需任何酶促处理，直接和目标载体混合，20分钟一站式解决所有问题，实现完美的无缝连接，操作简单，成本较低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 目的 dna 片段 插入 载体 中的 方法 | ||
【主权项】：
一种将目的DNA片段插入载体中的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计并合成扩增目的DNA片断的引物，该引物的最外侧有3～20个碱基与线性载体最外侧完全互补，用该引物扩增目的DNA片段，得到两侧最外端增加了与线性载体两侧最外端完全互补的3～20个碱基的目的DNA片段；2)将步骤1)中得到的目的DNA片段和线性载体混合，加入同源外切重组酶进行反应，所述的同源外切重组酶是同时具有3’端至5’端外切酶活性和同源重组酶活性的重组酶，反应得到插入了目的DNA片段的重组载体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海捷瑞生物工程有限公司，未经上海捷瑞生物工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200910051959.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
