[发明专利]改良裸鼠结肠癌原位移植瘤模型的构建方法

摘要

本发明公开了一种涉及医学科研用的结肠癌移植瘤模型，是在裸鼠结肠癌原位移植瘤模型的基础上改良而来，旨在克服结肠癌原位移植瘤模型肠道梗阻发生率高、模型动物生存时间短、不能适用于较长时间实验的缺陷。本发明将制备好的瘤块移植到结肠系膜内血管附近，包括以下步骤：①瘤块的制备将肿瘤细胞的单细胞悬液，注入裸鼠皮下，制备移植瘤的瘤源；②将制备好的瘤块移植于裸鼠肠系膜内血管附近，而非肠管的浆膜层；③将裸鼠饲养于无菌层流室中，室温控制在(25±1)℃，相对湿度40％～50％，连续观察。按照本发明构建的动物模型能重现人结肠癌自然临床病理过程，短期内不会发生消化道管腔的梗阻，且转移模式与临床患者相似。

主权项

一种改良裸鼠结肠癌原位移植瘤模型的构建方法，其特征是，包括如下步骤：(1)瘤源的制备将结肠肿瘤细胞培养、传代后，用对数生长期的肿瘤细胞制备成单细胞悬液，调整细胞浓度至2×107/ml；注射前用碘酊局部皮肤消毒，以0.1ml/只裸鼠，用无菌一次性注射器注入裸鼠右侧腋下皮下；注射完毕后裸鼠自然进食；待瘤体直径达1cm左右时，处死荷瘤鼠，消毒皮肤，切下瘤块，去除坏死部分，选用淡黄色或呈鱼肉状瘤组织置于生理盐水中，剪成直径2mm的瘤块备用；(2)模型制作方法造模裸鼠禁食4h，以0.5％戊巴比妥溶液35～50mg/kg体重腹腔注射麻醉；用碘酊消毒，取下腹正中或经右侧腹直肌切口约2cm，逐层切开腹壁各层，以血管钳牵开腹膜，辨认升结肠；在距回盲部2cm的升结肠系膜上沿结肠肠轴平行方向做一0.3～0.4cm切口，将已制备好的瘤块2块置于结肠系膜内血管附近，并用3 0丝线缝合肠系膜切口；常规缝合腹壁切口，麻醉清醒后自然进食；饮水中添加琥乙红霉素1g/100ml；将裸鼠饲养于无菌层流室中，室温控制在(25±1)℃，相对湿度40％～50％，连续观察3周。