[发明专利]含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用有效
| 申请号： | 200910062093.X | 申请日： | 2009-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN101586119A | 公开（公告）日： | 2009-11-25 |
| 发明（设计）人： | 冯立芳;缪炜 | 申请（专利权）人： | 中国科学院水生生物研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12Q1/02;G01N21/76;C12R1/90 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430072湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用。利用质粒rDNA-GFP，通过酶切和PCR酶切位点突变等方法，构建质粒T-GFP；利用嗜热四膜虫基因组DNA，通过PCR扩增和克隆等方法，构建质粒T-HSP702；利用质粒T-GFP、T-HSP702和pD5H8，通过酶切和连接最终构建得到质粒HSP702-GFP-pD5H8。该载体含有HSP702启动子，能实现外源基因高效表达；该载体上含有可替换的外源基因gfp，通过替换不同的外源基因，以实现四膜虫成为一个外源基因表达系统；在巴龙霉素药物筛选作用下，该载体替换掉四膜虫体内原有的绝大部分rDNA，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，以实现目标基因的遗传转化。本发明方法易行，操作方便，该载体在转染进四膜虫中可用于环境中三丁基锡的检测。 | ||
| 搜索关键词： | hsp70 启动子 gfp 四膜虫 转基因 载体 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1、一种含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体HSP702-GFP-pD5H8，其序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
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