[发明专利]一种多顺反子表达载体构建方法无效
| 申请号： | 200910065465.4 | 申请日： | 2009-07-20 |
| 公开（公告）号： | CN101608187A | 公开（公告）日： | 2009-12-23 |
| 发明（设计）人： | 李瑞芳;薛雯雯 | 申请（专利权）人： | 河南工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/74;C12N15/75;C12R1/19;C12R1/125 |
| 代理公司： | 郑州中民专利代理有限公司 | 代理人： | 姜振东 |
| 地址： | 450001*** | 国省代码： | 河南;41 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 一种多顺反子表达载体构建方法，利用商品化T-载体作为中间载体，设计两对引物，在引物中引入NheI和SpeI酶切位点及核糖体结合位点(RBS)，将扩增产物与T-载体相连，所得重组T-载体用NdeI+NheI、NdeI+SpeI双酶切，得到的DNA片段用DNA连接酶连接，就能使单个异源基因以2n-1(n为上一步重组T-载体含目的基因个数)的方式在T-载体上递增。最后将含多个异源基因的DNA片段，通过对应于其两端酶切位点的限制性内切酶切下，亚克隆到表达载体启动子下游，即可得到多顺反子表达载体。本发明操作简单，适用范围广，适用于所有蛋白，特别是小肽的表达。构建的表达载体可直接转化原核宿主细胞，可为解决蛋白质原核基因工程表达中表达量低的瓶颈问题提供技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 顺反子 表达 载体 构建 方法 | ||
【主权项】：
1、一种多顺反子表达载体构建方法，其特征在于：利用T-载体作为中间载体，设计两对引物，在引物中引入NheI和SpeI酶切位点及核糖体结合位点(RBS)，以含目的基因的DNA为模板，进行PCR扩增，扩增产物重组到T-载体上，将得到的重组T-载体用NdeI+NheI、NdeI+SpeI双酶切，所得DNA片段用DNA连接酶连接，就能使单个异源基因以2n-1(n为上一步重组T-载体含目的基因个数)的方式在T-载体上递增；最后将含多个异源基因的DNA片段，通过对应于其两端酶切位点的限制性内切酶切下，亚克隆到表达载体启动子下游，即可得到多顺反子表达载体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河南工业大学，未经河南工业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200910065465.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
