[发明专利]结核分枝杆菌噬菌体随机肽库

摘要

本发明公开了结核分枝杆菌噬菌体随机肽库，它是在严格条件下，用DNase I消化结核分枝杆菌H37Rv基因组，得到50-80bp基因片段，连接于噬菌体M13KE上，用鹿结核IgG，进行三轮淘选获得的结核分枝杆菌噬菌体随机肽库。通过小鼠的皮肤变态反应、免疫小鼠血清中特异性抗体的检测试验、免疫小鼠脾淋巴细胞增殖试验、牛结核分枝杆菌BCG的攻毒试验小鼠肺荷菌量与对照组比较差异显著；证明其抗原性优于牛结核分枝杆菌BCG，毒性低于牛结核分枝杆菌BCG，也为进一步的结核杆菌抗原模拟表位的淘选和结核病新型诊断试剂及新型疫苗的研发奠定了一定的基础。

主权项

1、结核分枝杆菌噬菌体随机肽库，其特征在于，是由下述方法制备的：A、用现有技术方法提取结核分枝杆菌H37Rv基因组；B、按H37Rv基因组12.0μl(DNA浓度4.8μg/μl)、DNaseI0.5μl、10×Buffer1.5μl比例配制反应系，温度16℃消化结核分枝杆菌H37Rv基因组；反应30min；加入1/10体积的EDTA(0.25M)终止反应，得随机基因片段50-80bp；C、取脱磷酸的噬菌体M13KE和平端化的随机DNA片段进行连接，连接体系为：M13KE8μl、随机DNA片段25μl、10×Buffer-24μl、T4DNA连接酶(NEB)3μl，总体积为40μl；电击参数为：2mm电击杯，电压2500v，电阻200Ω，电容25μF；电击后记录数为：电压2385v，时间3.4ms，分别于16℃连接16h；得结核分枝杆菌噬菌体随机肽库，用TU(transducting unit，TU)值来衡量，库容量为62×100×100＝6.2×105/ml。