[发明专利]一种通过诱变提高热带假丝酵母菌对镉的耐受性的方法无效
| 申请号： | 200910069718.5 | 申请日： | 2009-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN101955927A | 公开（公告）日： | 2011-01-26 |
| 发明（设计）人： | 孙红文;姜春晓;王婷;张彦峰;张清敏 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N15/01 | 分类号： | C12N15/01;C12Q1/04;C12R1/74 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300071 天津市南开区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通过诱变提高热带假丝酵母菌对镉的耐受性的方法，包括以下步骤(1)制备热带假丝酵母菌原生质体，(2)预培养后的活菌落进行亚硝酸诱变：于终浓度为0.025mol/L的亚硝酸溶液处理10-20min，诱变后在含镉培养基平板和摇瓶发酵筛选，所得活菌落即为对镉具耐受性的突变菌。通过本方法，得到对高浓度镉充分耐受的突变菌C44，其对镉的耐受浓度达到0.8mmol/L。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通过 诱变 提高 热带 酵母菌 耐受 方法 | ||
【主权项】：
一种通过诱变提高酵母菌对镉的耐受性的方法，其特征依次包括以下步骤：(1)首先将热带假丝酵母菌接种于葡萄糖蛋白胨液体培养基(YEPD)斜面，培养至处于对数生长期中段。取5mL菌悬液于离心管中，加入β‑巯基乙醇‑PB溶液和0.06mol/LEDTA溶液预处理。加入2％的蜗牛酶‑高渗缓冲液悬浮，在28‑30℃下，低速振荡恒温水解60‑90min，定时取样镜检观察，当大部分细胞转化成球形的原生质体时，在3500r/min下离心约10min，弃去上清液，终止酶解，用高渗缓冲液洗涤2次，重新将原生质体悬浮于高渗缓冲液中。(2)对步骤(1)中所制备的菌悬液3mL(106cells/mL)置于直径7cm的平底培养皿中，进行亚硝酸诱变：于终浓度为0.025mol/L的亚硝酸溶液处理10min，对诱变后的活菌落进行筛选，获得对镉具耐受性的突变酵母菌。(3)对步骤(2)诱变后的突变菌株进行筛选的方法为浓度梯度平板初筛和摇瓶发酵复筛相结合的两步筛选法。
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