[发明专利]一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法

摘要

一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，它涉及一种昆虫中肠RNA的提取方法。它解决了现有昆虫中肠RNA的提取方法存在操作复杂、费时、成本高及提取RNA产量低、易降解的问题。方法：一、先将2×CTAB缓冲液、聚乙烯聚吡咯烷酮加入离心管中，再加入经液氮研磨后的青杨天牛中肠混匀；二、将离心管进行热水浴处理；三、将氯仿/异戊醇加入到离心管进行离心处理；四、取上清液后重复步骤三；五、取步骤四离心后的上清液加LiCl溶液并冷却、静置后再离心；六、弃掉上清液并用乙醇清洗后进行离心；七、弃掉步骤六的上清液后将乙醇蒸发然后加入无菌水。本发明方法操作简洁，省时，成本低，成功率高并能够得到较高纯度、较高产量、不易降解的完整昆虫RNA。

主权项

1、一种青杨天牛中肠总RNA的提取方法，其特征在于青杨天牛中肠总RNA的提取方法按以下步骤实现：一、将500～700μL的2×CTAB缓冲液与0.5～1.0mg的聚乙烯聚吡咯烷酮加入到1.5mL的Eppendorf离心管中混匀，在液氮环境中，将青杨天牛中肠研磨后加入到Eppendorf离心管中，混匀；二、将Eppendorf离心管置于温度为55～65℃的水浴10min；三、将500μL～700μL的氯仿/异戊醇加入到Eppendorf离心管中，在离心速度为10000～13000r/min的条件下，离心处理5min；四、取离心上清液并放入新Eppendorf离心管后，重复步骤三；五、取步骤四离心后上清液并放入另一个新Eppendorf离心管中，然后加入体积为500～700μL、摩尔浓度为5mol/L的LiCl溶液，在温度为-4℃的条件下静置沉淀15min，而后在离心速度为10000～13000r/min的条件下，离心处理5min；六、弃掉上清液再用质量浓度为75％的乙醇清洗沉淀，而后离心处理30s；七、弃掉步骤六的上清液，然后将乙醇蒸发后加入40μL的无菌水，即可提取出青杨天牛中肠总RNA；其中步骤三中氯仿/异戊醇中氯仿与异戊醇按体积比24∶1的体积比混合；步骤二水浴过程中震荡2～3次/min。