[发明专利]DNA分子片段与载体连接的方法及在大容量抗体库构建中的应用有效
| 申请号： | 200910091261.8 | 申请日： | 2009-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN101619323A | 公开（公告）日： | 2010-01-06 |
| 发明（设计）人： | 孙志伟;王双;俞炜源;杜威世;余云舟 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C40B40/08 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人： | 王朋飞 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种DNA分子片段与载体连接的方法，载体上包括至少三个不同的酶切位点E1、E2和E3，其中E2位于E1和E3之间；待连接的DNA分子片段至少包括酶切位点E1和E3，先对载体上酶切位点E1和E2进行酶切和去磷酸化；再对DNA分子片段的酶切位点E1进行第一步酶切和连接，得到DNA分子片段和载体的线性连接产物，然后回收正确大小的连接产物；最后对连接产物的酶切位点E3进行第二步酶切和连接，得到自连接的环状连接产物。本发明能够实现DNA分子片段与载体之间有效的连接，降低了非正确连接的不同形式聚合体的产生，使正确连接产物的比例在连接体系中占到30％以上，有利于实现高效的电击转化。 | ||
| 搜索关键词： | dna 分子 片段 载体 连接 方法 容量 抗体 构建 中的 应用 | ||
【主权项】：
1、一种DNA分子片段与载体连接的方法，其特征在于，载体上包括至少三个不同的酶切位点E1、E2和E3，其中E2位于E1和E3之间；待连接的DNA分子片段至少包括酶切位点E1和E3，先对载体上酶切位点E1和E2进行酶切和去磷酸化；再对DNA分子片段的酶切位点E1进行第一步酶切和连接，得到DNA分子片段和载体的线性连接产物，然后回收正确大小的连接产物；最后对连接产物的酶切位点E3进行第二步酶切和连接，得到自连接的环状连接产物。
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