[发明专利]酵母G418为选择性标记的质粒的构建方法无效
| 申请号： | 200910095094.4 | 申请日： | 2009-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN101696418A | 公开（公告）日： | 2010-04-21 |
| 发明（设计）人： | 魏云林;谢莹莹;季秀玲;井申荣;林连兵 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12R1/865 |
| 代理公司： | 昆明今威专利代理有限公司 53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650093 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 一种以酵母G418为筛选标记的穿梭质粒构建方法，解决了目前酵母质粒多以营养缺陷型为筛选标记，难以在全营养型酵母菌基因工程改造中使用这一问题。构建方法为：克隆kanR基因，回收、纯化基因片段，并与pYES2载体连接。本发明方法所构建的载体可使原来对G418敏感的酿酒酵母对其产生抗性，使全营养型酵母无需进行营养缺陷型诱变即可进行基因操作，缩短了基因改造时间。 | ||
| 搜索关键词： | 酵母 g418 选择性 标记 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
酵母G418为选择性标记的质粒的构建方法，包括下述步骤：(1)kanR基因序列的克隆，以pPIC9K为模板，通过PCR扩增，扩增上游引物序列为5′-CATGCCATGGTCTGCCAGTGTTACAACCAAT-3′，扩增下游引物序列为5′-CTAGCTAGCATGCGACTCCTGCATTAG GAAG-3′；(2)回收、纯化PCR产物，利用限制性内切酶Nhe I和Nco I对其进行酶切；(3)用限制性内切酶Nhe I和Nco I酶切质粒pYES2；(4)回收、纯化酶切产物，在16℃连接8小时，获得以G418为抗性筛选标记的质粒。
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