[发明专利]一种耐冷红掌的转基因培育方法

摘要

本发明涉及一种耐冷红掌的转基因培育方法，包括以下步骤：取主栽红掌品种的顶芽为外植体，诱导愈伤组织，继代培养至快速增殖期，暗条件预培养，进行农杆菌共培养，转移到筛选培养基进行4轮筛选，取抗性愈伤组织诱导分化成苗，对抗性植株进行组织化学染色和分子检测，鉴定含目的基因的分化小苗，转移至生根培养基长成正常幼苗，对入选的转基因植株进行耐冷性鉴定，选留不受冻冻危害的转基因植株，继续种植入选的转基因红掌株系，评价验证耐冷性的表达稳定性，对稳定的优良株系进行繁殖，培育抗低温冻害的转基因耐冷红掌。

主权项

1.一种耐冷红掌的转基因培育方法，其特征在于包括以下步骤：1)取主栽红掌品种的顶芽为外植体，接种至诱导培养基，诱导愈伤组织；2)取诱导形成2周的愈伤组织，转移至继代培养基，继代培养至愈伤组织进入快速增殖期；3)取快速增殖的愈伤组织，在25℃黑暗条件下进行受体愈伤组织预培养3天；4)取预培养的愈伤组织，在农杆菌悬浮液中浸泡15分钟，之后弃去菌液，用无菌滤纸吸干，接种于共培养基上，在23℃黑暗条件下共培养3天；5)取共培养愈伤组织，洗净、晾干后，转移到筛选培养基，在25℃黑暗条件下培养4周，收集新长出的抗性愈伤组织，转移至新的筛选培养基上，再进行连续3轮继代筛选，每隔4周转继1次；6)取4轮筛选后的抗性愈伤组织，转移至分化培养基，诱导分化成苗，对抗性植株进行葡糖苷酸酶基因组织化学染色和分子检测，选取含目的基因的分化小苗，转移至生根培养基长成幼苗；7)取入选的转基因植株，转移至温度0℃下进行耐冷性鉴定4周，选留不受冻冻危害的转基因植株；8)继续种植步骤7)筛选的转基因红掌株系，室内外评价验证耐冷的表达稳定性，对稳定的优良株系进行繁殖，培育出转基因耐冷红掌。