[发明专利]毛竹微卫星分子标记的开发与应用

摘要

一种毛竹微卫星分子标记的开发，经过毛竹DNA序列的获得，含有微卫星位点的筛选，引物设计和微卫星位点的验证三步骤，最后获得19对微卫星分子标记引物，探索出其适宜的退火温度为46-59℃，再将毛竹微卫星引物经DNA聚合酶链式反应应用于其他6种刚竹属竹种，扩增并测序确认继而获得102条含有微卫星位点的刚竹属DNA序列。采用本方法开发竹类的微卫星分子标记，具有简单、快速、稳定、高效和低成本的优点，为竹子的辅助育种提供了新的工具。

主权项

1，一种毛竹微卫星分子标记的开发方法，其特征包括如下步骤：(1)毛竹DNA序列的获得：用毛竹的拉丁文学名作为关键词，在美国国立卫生研究院维护的基因序列数据库中检索并下载获得；(2)含有微卫星DNA序列的筛选：用单机版微卫星分析程序和在线微卫星位点分析软件，对下载的序列进行筛选，获得含有微卫星位点的毛竹DNA序列；(3)引物设计和微卫星位点验证：①引物设计：用引物设计软件设计扩增含有微卫星位点的DNA聚合酶链式反应引物，引物含有碱基数控制在18-22个，两引物退火温度差＜4℃，扩增的DNA片段在350个碱基以内；②微卫星验证：利用上述引物进行DNA聚合酶链式反应扩增、扩增产物的电泳分离、银染检测、微卫星位点的再扩增、亚克隆和测序确认工作，最后得到19对毛竹微卫星标记引物，其退火温度在46℃-59℃。