[发明专利]一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法无效
| 申请号： | 200910113920.3 | 申请日： | 2009-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN101575633A | 公开（公告）日： | 2009-11-11 |
| 发明（设计）人： | 黄时海;李湘萍;夏小斌;吴孔阳;陈桂光;梁智群;张云开;李灿明;汪晟;康超;何鑫平 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12P33/00 | 分类号： | C12P33/00;C12P33/02 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 | 代理人： | 黄永校 |
| 地址： | 530004广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明属于生化工程和酶工程技术领域，具体涉及一种利用猪肝、牛肝或羊肝等动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法，包括以下步骤：(1)微粒体酶液的制备；(2)酶促转化反应；(3)皂化反应；(4)萃取。利用本发明可以生产出与化学合成完全一致的7-脱氢胆固醇。并且工艺简单易行，既可以降低维生素D3生产成本又减少环境污染。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 动物 肝脏 微粒体 生物 合成 脱氢 胆固醇 方法 | ||
【主权项】：
1、一种利用动物肝脏微粒体酶生物合成7-脱氢胆固醇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)微粒体酶液的制备将切成块状的新鲜肝脏放入pH 5-9、0.01-0.1mol/L的谷胱甘肽磷酸缓冲溶液中，在4-35℃条件下用组织匀浆机匀浆，过滤，滤液进行超声波细胞破碎，处理条件为：功率150-400W、温度4-35℃、时间5-40min，随后于4℃，12000r·min-1，10min离心分离，取上清液，得到所述微粒体酶液，(2)酶促转化反应将所述微粒体酶液和促进剂混匀，静置15min，加入1-100ug/ml的角鲨烯或羊毛甾醇、0.1-10mmol/L还原型辅酶II、0.1-10mmol/L三磷酸腺苷、1-100mmol/L烟酰胺、1-10mmol/L MgCL2反应5h，得到一种酶促转化反应液，(3)皂化反应将步骤(2)制备得的反应液加入5ml 10-15％KOH-乙醇溶液，在30-70℃振荡反应1-2h，得到一种皂化反应液，(4)萃取将步骤(3)制备得的皂化反应液用有机溶剂石油醚萃取，萃取剂与皂化反应液体积比为4∶1-8∶1，萃取温度30-60℃，萃取时间1-4h，萃取结束后，在氮气或减压条件下浓缩，得到7-脱氢胆固醇。
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