[发明专利]水牛胚胎干细胞的制备方法无效
| 申请号： | 200910113970.1 | 申请日： | 2009-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN101531994A | 公开（公告）日： | 2009-09-16 |
| 发明（设计）人： | 石德顺;黄奔;李童;崔奎青 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 广西南宁公平专利事务所有限责任公司 | 代理人： | 翁建华 |
| 地址： | 530004广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 一种水牛胚胎干细胞的制备方法，其工艺步骤为：经体外受精获得的水牛囊胚和孵化囊胚，去掉透明带及滋养层细胞，获得内细胞团细胞；用丝裂霉素处理的水牛胎儿成纤维细胞作为饲养层细胞，DMEM添加胎牛血清、非必需氨基酸、β-巯基乙醇、丙酮酸钠、小鼠重组白血病抑制因子、人重组碱性成纤维细胞生长因子和小鼠重组干细胞因子的培养液进行原代和传代培养。用本发明的方法获得了一批水牛胚胎干细胞克隆，且证明其具有胚胎干细胞的典型生物学特征和分化潜能。 | ||
| 搜索关键词： | 水牛 胚胎 干细胞 制备 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种水牛胚胎干细胞的制备方法，其特征是制备步骤为：(1). 水牛囊胚内细胞团的分离：经体外受精获得的水牛囊胚和孵化囊胚，去掉透明带及滋养层细胞，获得内细胞团细胞；(2). 水牛胚胎干细胞的培养：分离得到的内细胞团用经丝裂霉素预处理的水牛胎儿成纤维细胞层作为饲养层细胞，用杜贝柯氏最低成分培养液+20％胎牛血清+0.1mM非必需氨基酸+0.1mM β—巯基乙醇+1mM丙酮酸钠+20ng/ml小鼠重组白血病抑制因子、+40ng/ml人重组碱性成纤维细胞生长因子和20ng/ml小鼠重组干细胞因子的培养液培养8～10天，获得原代水牛胚胎干细胞克隆；(3). 水牛胚胎干细胞的传代培养：获得的水牛胚胎干细胞克隆，用0.25％胰蛋白酶的溶液消化5min，或用针头直接机械分离后，接种于水牛胎儿成纤维细胞饲养层上，加入同(2)的培养液继续培养；培养液每两天更换1次，直至形成干细胞克隆，再进行消化传代。
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