[发明专利]检测结核杆菌耐药基因膜芯片

摘要

一种检测结核杆菌耐药基因膜芯片，是针对结核杆菌rpoB、kagG、embB、inhA、ahpC、gyrA、rrs、rpsL、pncA基因的突变位点，设计54个探针点样于尼龙膜上而构成，利用5’端带有生物素标记的12对特异引物，将样品DNA经三重PCR，扩增出大量带生物素的基因片段产物，扩增产物与膜芯片上的探针进行特异性杂交，再经过洗膜，酶联和显色反应即可。所述基因膜芯片及其检测方法，能够一次性检测结核杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、喹诺酮类药物耐药的常见基因突变，适用于体外检测痰样、临床分离株以及组织样本中结核杆菌耐多药基因。

主权项

1、一种检测结核杆菌耐药基因膜芯片，其特征在于，针对常见结核杆菌rpoB、katG、embB、inhA、ahpC、gyrA、rrs、rpsL、pncA基因的突变位点，设计54个检测探针，将探针点样于尼龙膜上构建成膜芯片，每一个被检测样本的DNA分4个反应管，每管加入三对不同的引物，共12对引物是分别针对结核杆菌rpoB、katG、embB、inhA、ahpG、gyrA、rrs、rpsL、pncA基因特异设计的，其中每对引物中的下游引物5’端均带有生物素标记，在同一PCR条件下4个反应管同时经三重PCR，扩增出大量带有生物素的结核杆菌相应的基因片段产物，将扩增产物与膜芯片上的探针进行特异性杂交，杂交后带有生物素的目标基因与探针牢牢的结合在一块，洗去未结合的扩增基因片段，再进行酶联和显色反应即可用肉眼判断结果。