[发明专利]使用纳米脂质体免疫佐剂制备抗小分子物质抗体的方法

摘要

使用纳米脂质体免疫佐剂制备抗小分子物质抗体的方法，属于免疫学技术领域，先将大豆卵磷脂和胆固醇以1.8-2.5/1的重量比混匀，再以W/V为1/500-800的比例溶解于二氯甲烷溶剂中，加入烧瓶，旋转蒸发器上35-40℃减压蒸干；然后加入浓度为1.5-2.0mg/mL、与包埋材料的物料比为2.0-2.5/1的抗原溶液，强烈晃动，其中缓冲液用pH＝6.8-7.2的20mM的PBS；以每次200-300μg/只小鼠的量进行静脉注射免疫；二次加强免疫；选择特异性抗体效价高的小鼠用于细胞融合实验，筛选所需要的单克隆抗体。本发明：①包埋材料物相容性好，在动物体内易被降解、无毒性；②脂质体进入外周血分布到淋巴结和中枢免疫器官，迅速被免疫细胞捕获实现抗原提呈；③抗原被包埋在脂质体内部，增加抗原的稳定性，确保免疫效果。

主权项

1、使用纳米脂质体免疫佐剂制备抗小分子物质抗体的方法，其特征是：(1)将大豆卵磷脂和胆固醇以1.8-2.5/1的重量比混匀，再以W/V为1/500-800的比例溶解于二氯甲烷溶剂中，加入到圆底烧瓶，在旋转蒸发器上35-40℃减压蒸干，使大豆卵磷脂和胆固醇贴在容器壁上形成双分子层薄膜；(2)在圆底烧瓶中加入浓度为1.5-2.0mg/mL、与包埋材料的物料比为2.0-2.5/1的抗原溶液，强烈晃动，其中缓冲液用pH＝6.8-7.2的20mM的PBS；脂质体的粒径控制在50-100nm，包封在脂质体的小分子人工免疫抗原的比例为35-50％；(3)以包封在脂质体的小分子人工免疫抗原计算，以每次200-300μg/只小鼠的量进行静脉注射免疫；在初次免疫之后第3-4周，以同样免疫剂量对小鼠静脉注射脂质体包封的抗原，进行第一次加强免疫；在与第一次加强免疫相隔2-4周的时间段里，以同样免疫剂量对小鼠静脉注射脂质体包封的抗原，进行第二次加强免疫；选择特异性抗体效价高的小鼠用于细胞融合实验，筛选所需要的单克隆抗体。