[发明专利]一种日本血吸虫虫卵抗体磁微粒分离酶联免疫检测方法

摘要

本发明提供了一种日本血吸虫虫卵抗体磁分离酶联免疫检测方法，属于寄生虫病免疫诊断技术领域。本发明采用双抗原夹心法的免疫检测原理，将日本血吸虫虫卵抗原连接在直径0.1-5.0微米之间的磁性微球表面作为固相试剂，生物酶标记的日本血吸虫可溶性虫卵抗原作为酶标试剂。磁分离试剂和酶标试剂分别与样本中的日本血吸虫虫卵抗体结合，形成固相-抗原-抗体-酶标抗原夹心免疫复合物。本发明的优点在于：①以磁微粒代替传统酶标板作为固相载体，使免疫反应接近液相条件下进行，反应更充分和迅速，与传统ELISA方法比较，具有检测速度快、特异性高、重复性好的特点；②采用双抗原夹心法原理，一种试剂盒可同时用于人畜日本血吸虫病的检测。

主权项

1、一种日本血吸虫虫卵抗体磁微粒分离酶联免疫方法，其特征在于检测步骤为：(1)加样与免疫反应：在试管中加入5-100μL血清样本、阳性质控品或阴性质控品，然后加入20-100μL，0.1-10mg/mL的磁分离试剂，混匀后，37℃温育5-30分钟；(2)洗涤：使磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬30秒，然后再次使磁微粒在磁场中沉降，去除上清液。如此重复2-4次。(3)加入酶标试剂：在每一试管中加入生物酶标记的日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Schistosoma japonicum sominl.gifubminl.gife egg antigen，Sj-SEA)工作溶液30-120μL，混匀后，37℃温育5-30分钟；(4)洗涤：使磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入100-500μL清洗液，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬30秒，然后再次使磁微粒在磁场中沉降，去除上清液。如此重复2-4次。(5)加底物溶液：每管加入50-300μL生物酶催化的显色或发光底物，混匀后，37℃温育5-30分钟。(6)终止显色(仅适用于显色法)：每管加入100-300μL终止液，并放在磁分离器上分离10分钟；(7)读值：在分光光度计或发光强度检测仪上读取吸光度或发光强度值。